АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

занятие № 4. тема: культивирование вирусов, риккетсий и хламидий

Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения.

Задача 1. ОПИСАТЬ СПОСОБЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ.

Для этого надо знать:

1. Культивирование вирусов необходимо для диагностики инфекционных заболеваний, для изучения патогенеза и иммунитета, для получения диагностических и вакцинных препаратов.

2. Вирусы – облигатные внутриклеточные паразиты, поэтому их невозможно культивировать на искусственных питательных средах. Вирусы культивируют на уровне организма или в живых клетках. При этом используют клетки с повышенным метаболизмом.

3. Существуют три способа культивирования вирусов:

а) на лабораторных животных: применяют подкожный, интраназальный, внутримышечный, внутрибрюшинный, субдуральный и др. методы заражения чувствительных к определенным вирусам животных: белых мышей (вирусы бешенства, энцефалита, гриппа), хорьков (вирусы гриппа), кроликов (вирус бешенства, натуральной оспы), обезьян (вирус полиомиелита); выбор метода зависит от тропизма вируса: например, респираторными вирусами заражают интраназально (закапывают вируссодержащий материал в нос), нейротропными – в головной мозг и т.д. Индикация (обнаружение) вируса проводится по развитию типичных признаков заболевания. На первых этапах развития вирусологии этот метод был единственным методом для изучения свойств и размножения вирусов. В наше время он используется для изучения патогенеза и иммунитета. Применение его ограничено, т.к. животные невосприимчивы к вирусам человека.

б) в куриных эмбрионах (метод Гудпасчура): исследуемый материал вводят в разные полости и ткани эмбриона; куриный эмбрион – очень удобный объект, т.к. защищен от попадания микроорганизмов из окружающей среды (стерильный) и других факторов; в нем отсутствуют скрытые вирусные инфекции; техника работы с ним проста; можно накопить большое количество вирусов. Но не все вирусы (вирус полиомиелита, вирус ящура) способны размножаться в куриных эмбрионах; невозможно обнаружить микроб без предварительного вскрытия эмбриона; в нем очень много белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку микроорганизмов при изготовлении различных препаратов.

в) в тканевых культурах: для их приготовления используют самые различные ткани человека, животных, птиц; чаще всего – эмбриональные и опухолевые ткани, обладающие повышенной метаболической активностью. Метод выращивания различных клеток вне организма на искусственных питательных средах разработан Дж. Эндерсом в 50-е годы. Большинство вирусов способно размножаться в культурах клеток, при этом для каждого вируса можно подобрать наиболее чувствительную к нему культуру клеток и создать стандартные условия.

Задача 2. ОПИСАТЬ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ В КУРИНОМ ЭМБРИОНЕ.

Для этого надо знать:

1. Для культивирования вирусов используют эмбрионы в возрасте от 8 до 12 дней. Для выращивания эмбрионов оплодотворенные яйца помещают в термостат при 38° С, в котором находится посуда с водой для создания влажности. Два раза в день яйца вынимают для проветривания. Периодически яйца просматривают в овоскоп на жизнеспособность. Живые эмбрионы отличаются подвижностью, пульсацией сердца, хорошо контурируемыми сосудами. Перед заражением эмбрион осматривают в овоскоп и намечают границы воздушного мешка, а также расположение зародыша.

2. Для предотвращения инфицирования эмбриона посторонними микробами заражение проводят в асептических условиях с использованием стерильного инструмента (ставят в стаканчик со спиртом) в помещении, облученном бактерицидными лампами. Скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70 % спиртом, обжигают, смазывают 2 % йодом, вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал обрабатывают антибиотиками для удаления бактериальной флоры.

3. Существует несколько способов заражения куриного эмбриона. Чаще всего материал вводят в аллантоисную и амниотическую полости, на хорион-аллантоисную оболочку и в желточный мешок.

При заражении в аллантоисную полость в скорлупе над воздушной камерой проделывают небольшое отверстие с помощью ножниц или скальпеля. Туберкулиновым шприцем вводят 0,1-0,2 мл вируссодержащего материала на глубину 2-3 мм ниже границы воздушной камеры. Прокол в скорлупе заливают расплавленным парафином.

При заражении на хорион-аллантоисную оболочку ножницами вскрывается скорлупа над воздушной камерой, пинцетом приподнимается подскорлуповая оболочка и шприцем на оболочку наносят 0,2-0,5 мл вируссодержащего материала при вертикальном положении эмбриона. Отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином.

Заражение в амниотическую полость осуществляется длинной иглой через отверстие в воздушной камере. Иглу вводят в темной комнате под контролем овоскопа. При попадании иглы в полость эмбрион сдвигается. Заражение приводит к непосредственному контакту вируса с тканями эмбриона, поэтому в данном случае вирус размножается не только в полости, но и в тканях зародыша.

При заражении в желточный мешок вируссодержащий материал вводят иглой длиной 3-4 см, которой проделывают отверстие в воздушной камере. Иглу ведут к центру с небольшим отклонением книзу при горизонтальном положении эмбриона. Отверстие в скорлупе запаивают каплей парафина.

После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С.

4. Через 48-72 часа (срок максимального накопления вирусов) производят вскрытие зараженных эмбрионов. Перед вскрытием эмбрионы оставляют на ночь при 4° С. После обработки скорлупы спиртом и 2 % раствором йода ее рассекают ножницами немного выше очерченной карандашом границы воздушной камеры, наклоняя яйцо так, чтобы избежать попадания скорлупы в полость. Скорлупу отбрасывают, осторожно снимают ее оболочку и рассматривают хорион-аллантоисную оболочку. Затем пастеровской пипеткой прокалывают эту оболочку в участке, свободном от сосудов, и отсасывают аллантоисную жидкость. После этого извлекают хорион-аллантоисную оболочку, дважды промывают физиологическим раствором, помещают в чашку Петри и отмечают на черном фоне наличие специфических поражений.

5. О репродукции вируса судят по специфическому характеру поражений на хорион-аллантоисной оболочке, по гибели эмбриона, по РГА – реакции гемагглютинации (склеивание эритроцитов).

Особенно четко очаги поражения на хорион-аллантоисной оболочке появляются в месте заражения в виде геморрагий, белесоватых очагов (вирус кори или гриппа вызывает образование оспин на оболочке).

По РГА устанавливают присутствие вируса в аллантоисной жидкости. РГА основана на способности некоторых вирусов адсорбироваться на поверхности эритроцитов и, изменяя их поверхность, вызывать склеивание. РГА ставят на стекле или в пробирках: готовят двукратное разведение вируссодержащего материала, добавляют 1 % взвесь отмытых куриных эритроцитов и оставляют при комнатной температуре. Результаты учитывают через 30-40 минут после оседания эритроцитов в контрольной пробе, в которую вместо вируссодержащего материала добавляют аллантоисную жидкость незараженного эмбриона. При гемагглютинации образуется зернистый осадок с фестончатыми краями, а в контроле – осадок в виде диска с ровными краями. Наличие гемагглютинации в опытных пробирках при ее отсутствии в контроле указывает на присутствие вируса в исследуемой жидкости.

Задача 3. ОПИСАТЬ ТКАНЕВЫЕ КУЛЬТУРЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ.

Для этого надо знать:

1. Бывают культуры растущих тканей и переживающих тканей (утративших способность к росту), которые выращивают в жидкой среде или с плотным покрытием.

2. В зависимости от техники изготовления существуют три основных типа растущих тканевых культур:

а) однослойныетканевые культуры – клетки прикрепляются и растут в виде сплошного монослоя, стелющегося по поверхности стекла лабораторной посуды;

б) культуры суспензированных клеток – клетки растут и размножаются во взвешенном состоянии при интенсивном перемешивании среды; их используют для большого накопления вирусов;

в) органные культуры или культуры фиксированных кусочков - кусочки органов животных и человека, выращиваемых вне организма и сохраняющие свойственную им структуру.

3. Однослойные культуры – основные культуры, используемые в современной лабораторной и производственной вирусологической практике. По числу жизнеспособных генераций они подразделяются на:

а) первичные (первично-трипсинизированные) – клетки этой культуры используются в течение одной генерации, т.е. каждый раз необходимо вновь получать культуру ткани; культуру готовят путем измельчения ткани, разъединения клеток при обработке тканей трипсином, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их размножение; при оседании клетки ткани легко и довольно прочно прикрепляются к стенке пробирки или флакона, на которой растут и распространяются в виде монослоя; чаще всего используют эмбриональные ткани (клетки типа фибробластов, почечная ткань эмбриона человека и обезьян, амниона человека, фибробласты куриного эмбриона, эмбриона мыши), а также ткани взрослого человека нормального или опухолевого происхождения;

б) перевиваемые – эти культуры можно поддерживать путем непрерывных перевивок, т.к. клетки хорошо адаптированы к условиям постоянного существования in vitro; их готовят из линий клеток, которые хорошо размножаются в течение многих лет; чаще всего эти культуры получают из опухолевых клеток. Получено около 200 штаммов таких клеток: штамм L (из культуры мышиных фибробластов), штамм HeLa (из карциномы шейки матки), штамм Hep-3 (из лимфоидной карциномы) и т.д. Работа по получению этих культур менее трудоемка, клетки их одинаковы и стабильны в своих свойствах; они способны размножаться в течение длительного срока в лабораторных условиях и сохранять свои свойства в замороженном состоянии (t° = -70° C) в течение многих лет;

Первичные и перевиваемые линии клеточных культур могут быть контаминированы микоплазмами и неизвестными вирусами, среди которых встречаются онкогенные (вирус SV40 в культуре почечных клеток обезьян). Возможность внесения в организм человека вместе с вакциной онкогенных вирусов резко ограничивает использование перевиваемых линий клеточных культур в производстве вирусных вакцин и требует проведения соответствующих контролей.

в) полуперевиваемые – клетки этих культур способны размножаться в течение 50 пассажей (перевивок), сохраняя исходный диплоидный набор, типичный для соматических клеток используемых тканей; для их приготовления используют диплоидные клетки человека (фибробласты человеческого эмбриона, диплоидные клетки легких человека). Диплоидные клетки не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых; они нашли широкое применение в вирусологии, особенно в производстве вакцин.

3. Для выращивания клеточных культур необходимы клеточные среды сложного состава (минеральные соли, глюкоза, аминокислоты, витамины, кофакторы; вносят сыворотку крови и буферные растворы, антибиотики для предотвращения бактериального загрязнения). К ним относятся среда 199, среда Игла, среда Тироде.

4. Все работы с культурами клеток требуют строжайшего соблюдения правил асептики во избежание заноса в них различных микроорганизмов из окружающей среды. Для предотвращения загрязнения культуры бактериальной флорой к ней добавляют антибиотики (пенициллин, стрептомицин).

5. После получения монослоя жизнеспособной культуры клеток, которая начинает расти и размножаться, и изучения ее под микроскопом (´8) культуру заражают 1 мл вируссодержащего материала. Пробирку закрывают стерильной резиновой пробкой и в наклонном положении помещают в термостат при 37° С на 5-7 суток.

Задача 4. ОПИСАТЬ СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСОВ В ТКАНЕВОЙ КУЛЬТУРЕ.

Для этого надо знать:

1. После внесения вируса (заражения) в тканевую культуру он проникает в клетки, в которых интенсивно репродуцируется, повреждая клетки.

2. Репродукцию вирусов в культуре клеток можно обнаружить по следующим признакам:

а) цитопатическое действие (ЦПД) – наблюдаются морфологические изменения клеток (вакуолизация цитоплазмы, деструкция митохондрий, округление клеток), при этом часть из них погибает и отслаивается от поверхности стекла, в результате вместо сплошного клеточного монослоя остаются лишь отдельные клеточные островки; ЦПД обнаруживается микроскопически (´8) и служит не только для обнаружения, но и для идентификации вирусов, поскольку характер цитопатических изменений для разных вирусов неодинаков; например, вирус полиомиелита вызывает мелкозернистую деструкцию клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений клеток в виде виноградных гроздьев; вирус кори вызывает образование симпластов – многоядерных клеток;

б) образование включений в клетках культуры – в ядре или цитоплазме образуются скопления вирусных частиц, имеющие различную форму и размеры (от 0,25 до 25 мкм); они могут быть выявлены в препаратах, приготовленных из ткани и окрашенных по Романовскому-Гимзе или флюорохромами;

в) способность к гемадсорбции – инфицированная культура клеток способна адсорбировать эритроциты, что хорошо видно под микроскопом; вирусы выходят на поверхность клеток, в которых они репродуцировались и связывают эритроциты, что позволяет судить о репродукции вирусов даже при отсутствии ЦПД; взвесь эритроцитов добавляют в культуру и после некоторого контакта промывают физиологическим раствором; на поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты в виде разнообразных фигур;

г) реакция гемагглютинации – скучивание эритроцитов кур, гусей, морских свинок под влиянием вирусов, содержащих в своей оболочке гемагглютинин (см. выше); их обнаруживают в культуральной жидкости клеточной культуры;

д) "цветная" реакция – клетки выращиваются на среде с индикатором (метиленовым красным), который изменяет цвет (с красного на желтый) под влиянием кислых продуктов метаболизма при росте незараженных клеток; при репродукции вируса нарушается нормальный метаболизм, рН не сдвигается и сохраняется первичный (красный) цвет среды.

Задача 5. ОПИСАТЬ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕТРАЦИИ ВИРИОНОВ.

Для этого надо знать:

1. Проводят определение количества вирионов в 1 мл среды (титр вируса).

2. Используется 2 метода:

а) титрование по ЦПД: клетки культуры заражают 10-кратным разведением вируса; после 6-7-дневной инкубации просматривают на наличие ЦПД; за титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур; титр выражают количеством цитопатических доз (ЦПД₅₀);

б) метод "бляшек": культуру клеток заражают вирусом и покрывают тонким слоем агара, что ограничивает распространение вирусов после выхода их из клетки, и инфицируются только соседние клетки; после инкубирования посевов в течение нескольких суток на агаровом покрытии появляются "стерильные пятна" – просветленные участки определенной формы – участки погибших клеток в сплошном монослое клеточной культуры – "бляшки". Считается, что одна "бляшка" – потомство одной вирусной частицы; она хорошо заметна в виде светлого круглого участка на красном фоне клеток, прижизненно окрашенных нейтральным красным; титр вируса выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл. Размеры, форма и сроки появления отличаются у разных видов вирусов и штаммов, что используется для идентификации.

Задача 6. ОПИСАТЬ ОСОБЕННОСТИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РИККЕТСИЙ И ХЛАМИДИЙ.

Для этого надо знать:

1. Риккетсии и хламидии – бактерии – облигатные внутриклеточные паразиты. В отличие от вирусов размножаются простым делением, содержат оба типа НК (ДНК и РНК) и многие ферменты, необходимые для энергетического и пластического метаболизма. Риккетсии по типу дыхания – аэробные микроорганизмы, активно окисляют глутаминовую кислоту и не расщепляют глюкозу, имеют высокопроницаемую оболочку, что позволяет им получать из клетки-хозяина необходимые ферменты и метаболиты. Хламидии – энергетические паразиты клетки-хозяина, у них отсутствуют энергодающие ферментные системы.

2. Искусственные питательные среды даже самого сложного состава не могут удовлетворить потребности риккетсий и хламидий. Для их размножения необходимы живые метаболизирующие клетки, в отличие от вирусов, эти клетки должны обладать пониженной метаболической активностью.

3. Для выделения и культивирования риккетсий и хламидий применяются: а) тканевые культуры (описаны выше); б) куриные эмбрионы; в) восприимчивые лабораторные животные.

4. Культивирование риккетсий проводят на переживающих тканях в жидкой среде Мейтлендов (раствор Тироде и сыворотка) при 37° С 10-14 дней или на Тироде-сывороточном агаре с добавлением на поверхность измельченной эпителиальной ткани при 37° С 6-10 дней.

В тканевых культурах, пораженных риккетсиями, на 3-8-ой день отмечается большое количество коккобациллярных форм, заполняющих целиком цитоплазму или ядро клеток, которые затем гибнут. Хламидии обнаруживают в препаратах клеток, окрашенных по Романовскому-Гимзе, в которых наблюдают различные формы размножающихся организмов.

5. Для выделения риккетсий и хламидий широко используется их культивирование в 8-12-дневном курином эмбрионе; материал вводят в полость желточного мешка или на хорион-аллантоисную оболочку. Зараженные яйца помещают в термостат при 37° С на 6-7 дней. Этот метод используется для массового накопления риккетсий при изготовлении риккетсиозных препаратов (вакцин, диагностических антигенов).

6. Для получения большого количества риккетсий их культивируют в организме чувствительных лабораторных животных – заражают интраназально белых мышей, в легких которых накапливается необходимое количество риккетсий.

7. Риккетсии выращивают по методу Вейгля и Мосинга: платяных вшей заражают взвесью риккетсий путем введения в кишку через анальное отверстие с помощью специальных капилляров. Пшеничнов и Райхер разработали метод культивирования риккетсий на личинках вшей, которых кормят дефибринированной кровью с риккетсиями через мембрану кожи трупа.

Вопросы и упражнения для самоподготовки.

1. Где происходит размножение вирусов? Чем это объясняется?

2. Для чего применяют культивирование вирусов?

3. Почему вирусы не могут расти на искусственных питательных средах?

4. Назовите три основных способа культивирования вирусов.

5. Каким образом производят культивирование вирусов на животных?

6. Какие животные используются для культивирования вирусов?

7. Отчего зависит выбор метода заражения животных вирусами?

8. Как проводится индикация вирусов при их культивировании в организме животных?

9. Для чего используют, в основном, культивирование вирусов в организме животных?

10. Чем ограничивается метод культивирования вирусов в организме животных?

11. Почему куриный эмбрион очень удобен для культивирования вирусов?

12. Какими способами производят заражение куриных эмбрионов вирусами?

13. Каким образом соблюдаются асептические условия при заражении куриных эмбрионов?

14. Опишите заражение куриного эмбриона в аллантоисную полость.

15. Опишите заражение куриного эмбриона на хорион-аллантоисную оболочку.

16. Опишите заражение куриного эмбриона в желточный мешок.

17. Опишите заражение куриного эмбриона в амниотическую полость.

18. Как проводится индикация вирусов при их культивировании в курином эмбрионе?

19. При помощи какой реакции можно установить присутствие вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона?

20. Как проводится реакция гемагглютинации?

21. Для чего используется РГА?

22. Опишите положительный и отрицательный результат РГА.

23. Как производится вскрытие куриного эмбриона?

24. В чем недостатки метода культивирования вирусов в куриных эмбрионах?

25. Что такое тканевая культура?

26. Какие ткани используются для приготовления тканевых культур?

27. В каких тканевых культурах проводится культивирование вирусов?

28. В чем заключается преимущество использования тканевых культур для культивирования вирусов?

29. Назовите три типа растущих тканевых культур.

30. Что такое однослойная тканевая культура?

31. Что такое культура суспензированных клеток?

32. Что такое органные культуры?

33. Какие тканевые культуры используются наиболее часто для культивирования вирусов?

34. Каким образом подразделяются однослойные тканевые культуры?

35. Что такое первичные культуры тканей?

36. Из каких тканей готовят первичные культуры тканей?

37. В чем заключаются преимущества и недостатки первичных тканевых культур?

38. Что такое перевиваемые культуры тканей? В чем преимущество перевиваемых тканевых культур?

39. В чем заключаются недостатки перевиваемых тканевых культур?

40. Назовите основные штаммы клеток для приготовления перевиваемых тканевых культур.

41. Из каких тканей готовят перевиваемые культуры?

42. Что такое полуперевиваемые тканевые культуры?

43. В чем преимущество полуперевиваемых тканевых культур?

44. Почему работу с тканевыми культурами необходимо проводить в строго асептических условиях?

45. Какие используются питательные среды для выращивания тканевых культур?

46. Как проводится выращивание тканевых культур?

47. По каким признакам судят о репродукции вирусов в тканевых культурах?

48. Что такое ЦПД?

49. Для чего используют ЦПД?

50. Почему ЦПД можно использовать для идентификации вирусов?

51. Почему наблюдается ЦПД при выращивании вирусов в тканевых культурах?

52. Для чего используется выявление вирусных включений в клетках культуры тканей?

53. Каким образом выявляют вирусные включения в клетках культуры?

54. Почему гемадсорбция является признаком присутствия вирусов в тканевой культуре?

55. Как проводится реакция гемадсорбции?

56. Что наблюдается при положительной реакции гемадсорбции?

57. Опишите использование цветной реакции для индикации вирусов в тканевых культурах.

58. О чем свидетельствует изменение цвета среды с культурой клеток?

59. Изменяется ли цвет среды при заражении культуры клеток вирусами и почему?

60. О чем свидетельствует сохранение первоначального цвета среды с культурой клеток?

61. Какие вирусы можно обнаружить в культуральной жидкости по РГА?

62. Что используется для проведения реакции гемагглютинации?

63. Что такое титр вируса?

64. Какие методы используются для определения титра вируса?

65. Опишите титрование вируса по ЦПД.

66. Опишите титрование вируса методом "бляшек".

67. В каких единицах выражают титр вируса?

68. Почему для роста и размножения риккетсий и хламидий необходимы живые метаболизирующие клетки?

69. Какие методы применяются для культивирования риккетсий и хламидий?

70. Для чего используется культивирование риккетсий и хламидий?

71. Какие тканевые культуры используются для культивирования риккетсий?

72. Как проводится культивирование риккетсий в куриных эмбрионах?

73. Как проводится культивирование риккетсий в организме животных?

74. Как проводится культивирование риккетсий по методу Вейгля и Мосинга?

75. Как проводится культивирование риккетсий по методу Пшеничнова и Райхера?

Основная литература:

1. Воробьев А.А. и др. Микробиология. – М.: Медицина, 1994. – С.37-57.

2. Кочемасова З.Н. и др. Микробиология. – М.: Медицина, 1984. – С. 43-56, С. 77-94.

3. Елинов Н.П. и др. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 36-58.

4. Синюшина М.Н., Самсонова М.Н. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. –М.: Медицина, 1981. – С. 28-42, С. 168-172.

Дополнительная литература:

1. Тимаков В.Д. и др. Микробиология. – М.: Медицина, 1983. – С. 47-94.

2. Пяткин К.Д., Кривошеина Ю.С. Микробиология. – М.: Медицина, 1980. – С. 42-78.

3. Борисов Л.Б. и др. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1984. – С. 42-68.

4. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник/Л.Б. Борисов, А.М. Смирнова, И.С. Фрейдлин и др.; Под ред. Л.Б. Борисова, А.М Смирновой. – М.: Медицина, 1994. – С. 44-80.

Елена Григорьевна Доркина

Физиология микроорганизмов.

Учебно-методическое пособие для самоподготовки студентов.

Подписано к печати "___"_____________1998 г. Формат 60´84 1/16

Бумага писчая белая. Усл.-печатн. л. 2,0 Уч.-изд. л. 2,0

Тираж _________ экз. Заказ №

Пятигорская гос.фармакадемия,

357532 г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

Ротапринт ПГФА г. Пятигорск, пр. Калинина, 11

Контрольные вопросы

1. Какой химический состав имеют бактерии? В чем его особенности?

2. Какую роль выполняют основные химические соединения бактериальной клетки?

3. На какие основные группы делятся бактерии по типу питания?

4. Охарактеризуйте фотоавтотрофный тип питания.

5. Охарактеризуйте хемоавтотрофный тип питания.

6. Охарактеризуйте хемо"органо"гетеротрофный тип питания.

7. Какие бактерии называются прото- и ауксотрофными? Какие вещества необходимо добавлять в питательные среды при выращивании ауксотрофных бактерий?

8. Охарактеризуйте механизмы транспорта питательных веществ в бактериальную клетку.

9. Перечислите основные требования к питательным средам.

10. Для чего используются основные питательные среды? Приведите примеры жидких и плотных основных сред.

11. Для чего используются специальные питательные среды? Приведите примеры жидких и плотных специальных питательных сред.

12. Для чего используются элективные питательные среды? Приведите примеры жидких и плотных элективных сред.

13. Для чего используются дифференциально-диагностические питательные среды. Приведите примеры этих сред.

14. Объясните состав и механизм работы среды Эндо. Для чего используется эта среда?

15. Что такое чистая культура? Объясните принцип механических способов выделения чистых культур.

16. Объясните суть трех этапов выделения чистой культуры аэробных бактерий.

17. По совокупности каких признаков проводится идентификация чистых культур?

18. Опишите работу первого дня по выделению чистой культуры аэробов.

19. Опишите работу второго дня по выделению чистой культуры аэробов.

20. Опишите работу третьего дня по выделению чистой культуры аэробов.

21. Назовите способы размножения бактерий и опишите механизм бинарного деления.

22. Назовите фазы роста периодической культуры бактерий на жидкой питательной среде.

23. Что такое колония? По каким признакам и для чего провидится описание колоний?

24. В чем суть и значение процесса дыхания у бактерий?

25. Какие существуют типы дыхания у бактерий? Что такое аэробные тип дыхания?

26. Какие существуют типы дыхания у бактерий? Что такое анаэробные тип дыхания?

27. Что такое брожение? В каких условиях оно протекает? Перечислите виды брожения.

28. Какие бактерии называются облигатными анаэробами? Приведите примеры. Почему кислород токсичен для этих бактерий?

29. Какие бактерии называются факультативными анаэробами? Приведите примеры.

30. Какие методы используют для создания анаэробиоза? Опишите метод Виньяля-Вейона.

31. Опишите среду Китта-Тароцци. Для чего она используется?

32. Что такое анаэростат? Для чего он используется?

33. Опишите химические методы создания бескислородных условий.

34. Опишите метод Фортнера. Для чего он используется?

35. Что такое ферменты? Какими свойствами они обладают?

36. Приведите классификацию ферментов по типу катализируемой реакции.

37. Какие ферменты называются эндо- и экзоферментами? Какое значение для бактерий имеют экзоферменты?

38. Какие ферменты называются конститутивными и индуцибельными?

39. Почему ферментативные свойства используют для идентификации бактерий? Какие ферменты чаще всего для этого определяют?

40. Что такое сахаролитические свойства бактерий? Для чего и каким образом их исследуют?

41. Что такое протеолитические свойства бактерий? Для чего и каким образом их исследуют?

42. Какие окислительно-восстановительные ферменты, и каким образом выявляют у бактерий?

43. Опишите состав и механизм работы жидких сред Гисса.

44. Опишите состав полужидких сред Гисса? Для идентификации каких бактерий чаще всего используют среды Гисса?

45. Что такое "пестрый" ряд?

46. Как изучаются протеолитические свойства бактерий по способности разжижать желатин?

47. Определение каких конечных продуктов используется для оценки протеолитических свойств бактерий? Как их выявляют?

48. Объясните суть трех этапов работы по выделению чистой культуры анаэробов.

49. Опишите посев по методу Цейсслера.

50. Опишите посев по методу Вейнберга.

51. Какие еще среды (кроме сред Гисса) используются для изучения способности бактерий расщеплять различные углеводы?

52. Почему вирусы не культивируют на искусственных питательных средах? Перечислите основные методы их культивирования.

53. Назовите преимущества и недостатки культивирования вирусов в организме лабораторных животных.

54. Назовите преимущества и недостатки культивирования вирусов в курином эмбрионе.

55. Какие используются способы заражения куриных эмбрионов вируссодержащим материалом?

56. Как проводят культивирование вирусов в курином эмбрионе?

57. Как проводят индикацию вирусов в курином эмбрионе?

58. В чем преимущества и недостатки метода тканевых культур? Какие тканевые культуры используются для культивирования вирусов?

59. Опишите первичные однослойные культуры тканей.

60. Опишите перевиваемые однослойные культуры тканей.

61. Опишите полуперевиваемые однослойные культуры тканей.

62. Какими способами проводят индикацию вирусов в тканевых культурах?

63. Что такое ЦПД и для чего его используют?

64. Объясните использование явления гемадсорбции для индикации вирусов в тканевых культурах.

65. Как используется реакция агглютинации для обнаружения вирусов?

66. Опишите использование цветной реакции для индикации вирусов и обнаружения вирусных включений в тканевых культурах.

67. Какие методы используются для культивирования риккетсий и хламидий и почему?

68. Какие среды используют для культивирования риккетсий? Как проводят их культивирование в организме лабораторных животных и переносчиков?

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 2140 | Нарушение авторских прав