АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение гемоглобина унифицированным гемоглобинцианидным методом

Принцип метода: гемоглобин окисляют железосинеродистым калием (красная кровяная соль) в метгемоглобин (гемиглобин). Образующийся при взаимодействии гемиглобина с ацетонциангидрином окрашенный гемоглобинцианид определяют фотометрически. Его интенсивность пропорциональна содержанию гемоглобина.

Оборудование и реактивы:

1. Смесь реактивов для приготовления трансформирующего раствора: калий железосинеродистый (красная кровяная соль) – 200 мг; натрия бикарбонат – 1 г; ацетонциангидрин – 0,5 мл; дистиллированная вода – до 1 л.

2. Стандарт гемоглобина (лиофилизат).

3. Фотоэлектрокалориметр, спектрофотометр или гемоглобинометр.

4. Пипетка на 0,02 мл.

5. Колба мерная на 1,0 л.

Приготовление трансформирующего раствора: смесь реактивов и ацетонциангидрин количественно перенести в мерную колбу емкостью 1 л, довести до метки дистилированной водой и перемешать.

Приготовление стандартного раствора: вскрыть флаконы с лиофилизатом гемоглобина. Растворить содержимое флакона в 5 мл трансформирующего раствора и перемешать, избегая вспенивания. Хранить стандартный раствор при 2-8 ⁰С.

Методика: 0,02 мл крови (капилляр Сали) приливают к 5 мл трансформирующего раствора (разведение в 251 раз) и перемешивают. Через 10 минут на фотоэлектроколориметре измеряют оптическую плотность при длине волны 500 – 560 нм (зеленый светофильтр) относительно «холостой» пробы (трансформирующий раствор). Для определения концентрации гемоглобина при этих же условиях измеряют оптическую плотность стандартного раствора.

Рассчитывают концентрацию гемоглобина (Hb) (г/л) по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемоглобинцианида или по формуле:

Hb =(А пробы / А стд) х С стд х К х 0,01,

где А пробы – оптическая плотность опытной пробы;

А стд – оптическая плотность стандартного раствора;

С стд – концентрация гемоглобинцианида в стандартном растворе;

К – коэффициент разведения крови;

0,01 – коэффициент пересчета мг % в г/л.

Построение калибровочного графика. Из стандартного раствора готовят разведения как указано в таблице.

Измеряют против «холостой» пробы на спектрофотометре при длине волны 540 нм или на гемоглобинометре.

Пределы колебаний концентрации гемоглобина у здоровых людей: у мужчин 130-160г/л, у женщин120-140г/л.

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 2588 | Нарушение авторских прав