АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение гемоглобина унифицированным гемоглобинцианидным методом

Прочитайте:
  1. I. Определение верхушечного толчка.
  2. I.1. Определение понятия
  3. II) Энзимологическое определение количества метаболитов.
  4. IV.1. Дыхательная недостаточность. Определение понятия
  5. А) Определение силы неизвестного анатоксина по известной антитоксической сыворотке
  6. А. Определение стресса
  7. А.Определение зон задержки роста микробов
  8. Абсцесс и гангрена легкого. Определение понятий. Классификация.
  9. Абсцесс, флегмона: определение, клиника, диагностика, лечение
  10. АНЕМИИ ВСЛЕДСТВИЕ НАРУШЕНИЯ ОБРАЗОВАНИЯЭРИТРОЦИТОВ И ГЕМОГЛОБИНА

Принцип метода: гемоглобин окисляют железосинеродистым калием (красная кровяная соль) в метгемоглобин (гемиглобин). Образующийся при взаимодействии гемиглобина с ацетонциангидрином окрашенный гемоглобинцианид определяют фотометрически. Его интенсивность пропорциональна содержанию гемоглобина.

Оборудование и реактивы:

1. Смесь реактивов для приготовления трансформирующего раствора: калий железосинеродистый (красная кровяная соль) – 200 мг; натрия бикарбонат – 1 г; ацетонциангидрин – 0,5 мл; дистиллированная вода – до 1 л.

2. Стандарт гемоглобина (лиофилизат).

3. Фотоэлектрокалориметр, спектрофотометр или гемоглобинометр.

4. Пипетка на 0,02 мл.

 

5. Колба мерная на 1,0 л.

 

Приготовление трансформирующего раствора: смесь реактивов и ацетонциангидрин количественно перенести в мерную колбу емкостью 1 л, довести до метки дистилированной водой и перемешать.

Приготовление стандартного раствора: вскрыть флаконы с лиофилизатом гемоглобина. Растворить содержимое флакона в 5 мл трансформирующего раствора и перемешать, избегая вспенивания. Хранить стандартный раствор при 2-8 0С.

Методика: 0,02 мл крови (капилляр Сали) приливают к 5 мл трансформирующего раствора (разведение в 251 раз) и перемешивают. Через 10 минут на фотоэлектроколориметре измеряют оптическую плотность при длине волны 500 – 560 нм (зеленый светофильтр) относительно «холостой» пробы (трансформирующий раствор). Для определения концентрации гемоглобина при этих же условиях измеряют оптическую плотность стандартного раствора.

Рассчитывают концентрацию гемоглобина (Hb) (г/л) по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемоглобинцианида или по формуле:

Hb =(А пробы / А стд) х С стд х К х 0,01,

где А пробы – оптическая плотность опытной пробы;

А стд – оптическая плотность стандартного раствора;

С стд – концентрация гемоглобинцианида в стандартном растворе;

К – коэффициент разведения крови;

0,01 – коэффициент пересчета мг % в г/л.

Построение калибровочного графика. Из стандартного раствора готовят разведения как указано в таблице.

 

Стандартный раствор, мл Трансформирующий раствор, мл Концентрация гемоглобина крови, г/л
- - «холостая» проба

Измеряют против «холостой» пробы на спектрофотометре при длине волны 540 нм или на гемоглобинометре.

Пределы колебаний концентрации гемоглобина у здоровых людей: у мужчин 130-160г/л, у женщин120-140г/л.

 

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 2493 | Нарушение авторских прав


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 |

При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)