АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Техника приготовления препаратов

Материал из уретры, влагалища, шейки матки, прямой кишки помещают на предметное стекло и распределяют сравнительно тонким слоем в виде равномерного сплошного мазка в центре препарата. Стекла обозначают буквамиU(urethra),V(vagina),C(cervix),R(rectum). Обычно на одном предметном стекле делают два мазка на расстоянии друг от друга. Для исследования доставляют в лабораторию 10-15 мл свежевыпущенной утренней порции мочи. Мочу центрифугируют, из осадка, нитей и хлопьев готовят нативные препараты и препараты для бактериоскопического исследования. С целью получения секрета предстательной железы и семенных пузырьков производят массаж простаты и первые капли сока берут на предметное стекло или же доставляют в небольшой порции мочи. При поражении суставов материалом для исследования служит полученный пунктат, в послеродовом периоде исследуют лохи, при заболевании глаз- гнойное отделяемое с конъюнктивы. Приготовленные мазки или собранный материал доставляют в лабораторию с направлением, в котором указывают место взятия материала и предполагаемый диагноз. В ответах из лаборатории нужно отмечать количество форменных элементов, эпителиальных клеток в мазке, присутствие или отсутствие других микроорганизмов (и их отношение к окраске по Граму), вагинальных трихомонад, дрожжевых клеток. Обнаружение гонококков производят с помощью следующих унифицированных методов.

Мазки должны быть равномерно размазанными, нетолстыми. Гонококки в тонких слоях окрашиваются грамотрицательно или переобесцвечиваются, в толстых - грамположительно. Высушенные на воздухе мазки фиксируют на пламени горелки и окрашивают (один мазок - 1%-ным раствором метиленового синего, второй - по Граму). При окраске по Граму лучше пользоваться водным раствором кристаллического фиолетового и 1%-ным водным раствором нейтрального красного. Мазок, окрашенный метиленовым синим, используется только для предварительного ориентировочного просмотра. Окончательное заключение по результатам микроскопии делается только на основании окраски препарата по Граму. Если не учесть это замечание, то можно допустить ошибку, так как другая флора, помимо гонококка, может располагаться внутриклеточно и иметь внешнее сходство с гонококком.

Окраска мазков по Граму

Реактивы и растворы: 1. 1% водный раствор кристаллического фиолетового. (Краску растворяют в горячей дистиллированной воде, раствор охлаждают и фильтруют через двойной бумажный фильтр). 2. Раствор Люголя (1 г кристаллического йода, 2 г калия йодида, 300 мл дистиллированной воды). 3. 96% этиловый спирт. 4.1% водный раствор нейтрального красного. На высохший и фиксированный на пламени мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги по размеру предметного стекла или несколько меньше, наливают раствор кристаллического фиолетового. Через 1-2 мин бумагу с краской снимают, мазок смывают водой и на 0,5-1 мин в зависимости от толщины мазка заливают раствором Люголя. После этого раствор сливают и мазок помещают в ванночку со спиртом для обесцвечивания под визуальным контролем, погружая и вынимая его из спирта до тех пор, пока с него не перестанут стекать струйки краски бледно-серого цвета. Препарат быстро промывают в воде, на 2 мин наливают раствор нейтрального красного, затем опять промывают в воде и высушивают на воздухе. Препарат помещают под микроскоп с иммерсионной системой при плоском зеркале и открытой диафрагме. В мазке, окрашенном по Грамму, на розовом фоне протоплазмы лейкоцитов выделяются гонококки ярко-розового цвета. Кроме того, гонококки могут локализоваться в нейтрофильных гранулоцитах. Часто они располагаются на эпителиальных клетках или под ними.

Окраска метиленовым синим.

Реактивы:1г метиленового синего растворяют в 100мл дистиллированной воды, фильтруют.

На мазки, высушенные на воздухе и фиксированные над пламенем спиртовки или метиловым спиртом, на 15-20 секунд наносится 1%-ный водный раствор метиленового синего, который затем осторожно смывается водой. После высушивания мазки микроскопируются. Цитоплазма форменных элементов окрашивается в бледно- голубой цвет, ядра – в синий, гонококки – в интенсивно- синий. Аналогично окрашиваются и другие кокки. Если они находятся внутри клеток, то напоминают гонококки.

Препарат микроскопируют под иммерсионной системой при плоском зеркале и открытой диафрагме. Гонококки окрашиваются в ярко-розовый цвет, протоплазма лейкоцитов - в слабо-розовый цвет. Ядра лейкоцитов и эпителиальных клеток, поскольку они удерживают частично кристаллвиолет, окрашиваются в слабо-синий цвет. В переобесцвеченном мазке ядра лейкоцитов и эпителиальных клеток почти не имеют фиолетовой окраски. В недообесцвеченном мазке гонококки окрашиваются в фиолетовый цвет и их можно принять за грамположительные кокки. В случае неправильной окраски мазка по Граму берут препарат, окрашенный метиленовым синим, предварительно снимая с него иммерсионное масло спиртом или ксилолом, и окрашивают по Граму.

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 844 | Нарушение авторских прав