АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Микробиологическая диагностика

Микроскопия. Выявление скоплений грамположительных кокков и полиморфнонуклеарных лейкоцитов при исследовании окрашеных мазков клинического материала может служить основанием для предварительного диагноза. Следует помнить, что результаты микроскопии нельзя считать достаточными для выдачи окончательного заключения.

Выделение возбудителя. Посев проводят на простые питательные среды, обычно на тиогликолевую среду и КА. Если существует риск контаминации образца, применяют дифференциально-диагностические среды. Наиболее часто используют молочно-солевой (или молочно-желточно-солевой) агар и солевой агар с маннитом, на них рост контаминирующей микрофлоры угнетает высокая концентрация NaCl. Кроме того, на молочно-солевом агаре (МСА) хорошо проявляется способность к пигментообразованию и разложению лецитина (лецитовителазная активность). В последнее время широкое распространение в качестве дифференциально-диагностической среды нашёл агар с колистином и налидиксовой кислотой.

Через 18–24 ч S. aureus образует гладкие выпуклые мутные колонии диаметром около 4 мм. Бактерии синтезируют жёлтый пигмент, цвет колоний варьирует от белого до оранжевого. На КА колонии S. aureus окружены зоной полного гемолиза (рис. 1 вклейки).

Стафилококки хорошо растут на бульоне, сначала вызывая его равномерное помутнение, а затем образуя рыхлый хлопьевидный осадок. Они дают весьма характерный рост в желатине: через 24–28 ч (наряду с обильным ростом по ходу укола микробиологической иглы) наблюдают начальное разжижение среды, а на 4–5-е сутки образуется открытая вниз воронка, заполненная разжиженной средой.

Для внутривидовой дифференцировки S. aureus применяют коагулазный тест (на наличие свёртывающего фактора), положительный у 95% изолятов (рис. 12 – 3). Существует ещё несколько дифференцирующих признаков.

Ы Вёрстка! Рисунок 12 - 03

Рис. 12 – 3. Коагулазный тест. Staphylococcus aureus вызывает коагуляцию плазмы крови и образование сгустка (нижняя пробирка).

• Способность ферментировать маннит в анаэробных условиях.

• Лецитовителазная активность — образование перламутрового преципитата-«венчика», окружающего колонии, выросшие на средах с добавлением яичного желтка. Преципитат состоит из фосфорилхолина, образующегося из лецитина яичного желтка под действием фермента.

• Способность синтезировать термостабильную ДНКазу.

• Способность агглютинировать сенсибилизированные эритроциты барана (последний тест позволяет выявить белок А, свёртывающий фактор либо оба продукта).

Для экспресс-идентификации применяют тест латекс - агглютинации с использованием коммерческих наборов частиц латекса, нагруженных АТ, например «Staphylatex» (American Microscan).

Серологические исследования (например, ИФА или РПГА для идентификации АТ к тейхоевым кислотам или видоспецифичным Аг) не имеют принципиального значения, а результаты часто носят противоречивый характер. Лишь для типовой идентификации энтеротоксинов проводят РП в геле со специфическими антисыворотками.

Идентификация при помощи типовых бактериофагов. Типирование бактериофагами достаточно широко применяют в клинической эпидемиологии. Для фаготипирования используют стандартный набор из 23 бактериофагов, разделённых на 4 группы: 1-я группа включает фаги 29, 52, 52А, 79, 80, 2-я — 3А, 3С, 55, 71, 3-я — 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85, 4-я — 94, 95, 96, а также внегрупповой фаг 81. Один штамм бактерий может лизировать один фаг или сразу несколько. Несмотря на это, признак достаточно стабилен, и с помощью соответствующих бактериофагов удаётся типировать 60–80% изолятов. Выявлены особые эпидемические штаммы (например, фаговаров 80 и 77), наиболее часто обнаруживаемые при внутрибольничных вспышках.

Образование энтеротоксинов. Для выявления применяют биологическую пробу — внутривенное заражение кошек фильтратом бульонной культуры (2–3 мл/кг). При попадании токсинов в кровоток у кошек развиваются рвота и диарея.

Определение чувствительности к антибиотикам. Значительная часть изолятов S. aureus либо синтезирует †-лактамазу, либо её синтез индуцируют †-лактамные антибиотики, и 85–90% штаммов может быть резистентно к этим ЛС. Для определения чувствительности используют метод дисков или серийных разведений.

Лечение. Основу терапевтических мероприятий составляет проведение адекватной антибактериальной терапии. При тяжёлом или хроническом течении следует применять антистафилококковый иммуноглобулин.

Иммунопрофилактика. Создание эффективной вакцины для профилактики поражений у человека и животных — актуальная и сложная проблема прикладной иммунологии. Это обусловлено наличием большого количества сероваров бактерий и отсутствием информации о роли всех антигенных субстанций в развитии искусственной невосприимчивости. В настоящее время получены убитые вакцины, обеспечивающие образование высоких титров АТ, но лишь к Аг вакцинных штаммов. Для создания антитоксического иммунитета используют стафилококковый анатоксин, но его активность ограничена лишь группой бактерий, преимущественно лизируемых фагами 1-й группы.

Эпидермальный стафилококк (S. epidermidis)

Бактерии колонизируют гладкую кожу и поверхность слизистых оболочек и обычно слабо вирулентны. Подавляющее большинство инфекций носит госпитальный характер, их чаще выявляют у пациентов с пониженной резистентностью (табл. 12 – 1). Типичными для эпидермального стафилококка считают поражения, обусловленные инфицированием различных устройств (протезов, катетеров, дренажей) либо гематогенным диссеминированием возбудителя после хирургических вмешательств. Например, он вызывает до 50% эндокардитов у больных с протезированными клапанами сердца. Достаточно часто микроорганизм обусловливает поражения мочевыводящей системы (особенно у лиц старше 50 лет с различными формами урологической патологии в анамнезе) и суставные инфекции, чаще развивающиеся не позднее 1 года после имплантации протеза (50% всех случаев).

Факторы патогенности. Способность вызывать поражения обусловливают гидрофобные свойства поверхности эпидермального стафилококка, облегчающие адгЌзию к субстратам, и поверхностный полисахаридный слизистый слой, предохраняющий бактерию от действия микробицидных и цитотоксических агентов. Подобно поражениям, вызываемым S. aureus, важное патогенетическое значение имеют компоненты клеточной стенки S. epidermidis, стимулирующие развитие воспалительных реакций и оказывающие многостороннее действие на ткани.

Микробиологическая диагностика. Микроскопия окрашеных мазков клинического материала позволяет выявить скопления грамположительных кокков и полиморфноядерных лейкоцитов. Микроорганизм не проявляет гемолитической активности, на КА образует беловатые гладкие выпуклые колонии (см. рис. 1 вклейки). Основное отличие от S. aureus — отсутствие коагулазной активности. Выделенные коагулаза-отрицательные стафилококки следует дифференцировать от других стафилококков, иногда выделяемых из мочи (например, S. saprophyticus). Для дифференцировки учитывают их резистентность к новобиоцину (МИК более 1,6 мкг/мл), к которому S. epidermidis чувствителен. Следует помнить о появлении и увеличении удельного веса метициллин-резистентных штаммов S. epidermidis (MRSE). Они обычно чувствительны к ванкомицину, особенно в комбинации с гентамицином и рифампицином.

Сапрофитический стафилококк (S. saprophyticus)

S. saprophyticus колонизирует кожные покровы половых органов и слизистую оболочку мочеиспускательного канала. Колонизацию эпителия мочевыводящих путей обусловливают поверхностные рецепторы, а также выделение ферментативного комплекса, подавляющего рост прочих бактерий. Наиболее часто микроорганизм вызывает циститы и дизурические расстройства у женщин, ведущих активную половую жизнь; реже возникают пиелонефриты и эндокардиты. Выделение проводят аналогично выделению прочих стафилококков, идентификацию — по чувствительности к новобиоцину и бацитрацину (к ним сапрофитический стафилококк чувствителен) и некоторым биохимическим тестам (наличию каротиноидного пигмента у 100% изолятов, способности расти при 15 °C, отсутствию щелочной фосфатазы и др.).

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 694 | Нарушение авторских прав