АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Эпителия с флюорохромом свечение клеток

В непрямом методе применяется флюоресцирующая антисыворотка к сыворотке того вида животного (антикроличья) на которой была приготовлена иммунная сыворотка для идентификации антигена

Клетки + специфическая иммунная + антисыворотка с флюорохр. = специфическое свечение клеток

Важным моментом является правильный забор материала от больного - полость носа необходимо очистить ватным тампоном от слизи. Сухим ватным тампоном берут мазки из нижних отделов носовой раковины и опускают во флакон с физиологическим раствором (2-3 мл), хорошо встряхивают. Затем центрифугируют 5 – 8 минут при 3000 оборотов. Из осадка делают мазки на обезжиренные предметные стекла. Затем фиксируют ацетоном или спиртом.

Затем проводят окраску: на мазок наносят по 1-2 капли меченного глобулина, помещают во влажную камеру на 30 минут. Отмывают и микроскопируют.

При микроскопировании диагностическое значение имеют клетки цилиндрического эпителия.

При гриппе – свечение отмечается в раннии сроки заболевания в ядре и в цитоплазме, в более поздние сроки – 4-5 день – светящиеся гранулы в цитоплазме.

При парагриппе - свечение в цитоплазмев в 90%, реже одновременно в ядре и цитоплазме.

При аденовирусной инфекции – 85 % свечение в ядре.

При RS – вирусной инфекции только в цитоплазме.

Сроки выявления антигена:

Грипп –7-10 дней, парагрипп – 10-14 дней, аденовирусы – до 2 месяцев,

RS – 3-10 дней.

2.1. Иммуноферментные методы обладают более высокой чувствительностью, возможностью одновременного анализа большого количества проб, возможность количественного учета результатов.

Принцип ИФА: вирусный антиген + специфическая сыворотка + антисыворотка,конъюгированная с ферментом (конъюгат) + субстрат (ортофенилдиамин) = расщепление субстрата и изменение цвета раствора (желто-оранжевый).

Выделение вирусов из клинического материала (смывы, кровь, биопсийный материал) на куриных эмбрионах (грипп А и В) и в культуре клеток (грипп, парагрипп, адено и RS – вирусная инфекция)

Изоляция вируса на культуре клеток – МДСК (перевиваемая культура почек спаниеля), Vero (почка обезьяны). Характер цитопатического действия при микроскопировании – разрыв монослоя с частично оставшимися участками

(клетки в среде).

Изоляция вируса на куриных эмбрионах. Исследуемый материал после соответствующей обработки (антибиотики) вводят в амниотическую полость

10 –11 дневных эмбрионов и инкубируют 3 дня при 35 градусах С. При вскрытии зараженных эмбрионов определяют наличие вируса в реакции агглютинации - Н –гемаглютинин агглютинирует эритроциты. Эритроциты кур, эритроциты морской свинки (парагрипп), 0 –группа крови человека.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 377 | Нарушение авторских прав