 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Теоретическая справкаАгглютинация - это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита (изотонического раствора хлорида натрия). Группы склеенных бактерий (клеток) называют агглютинатом. Для реакции агглютинации необходимы следующие компоненты: 1. Антитела (агглютинины), которые находятся в сыворотке больного или иммунного животного. 2. Антиген- взвесь живых или убитых микробов, эритроцитов или других клеток. 3. Изотонический (0,9%) раствор хлорида натрия. Реакцию агглютинации для серодиагностики применяют при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), при бруцеллезе (реакция Райта и Хеддлсона), туляремии и т.д. Антителом при этом является сыворотка больного, а антигеном известный микроб. При идентификации микробов или других клеток антигеном служит их взвесь, а антителом - известная иммунная сыворотка. Эту реакцию широко применяют для диагностики кишечных инфекций, коклюша и др. Возможные ошибки при постановке реакции агглютинации: 1. Спонтанная (самопроизвольная) агглютинация. Некоторые клетки, особенно микробы в R-форме, не дают гомогенной (однородной) взвеси, быстро выпадают в осадок. Во избежание этого следует пользоваться культурой в S-форме, которая не даёт спонтанной агглютинации. 2. В сыворотках здоровых людей имеются антитела к некоторым микроорганизмам (так называемые нормальные антитела). Титр этих антител не высок, по этому положительный результат реакции в разведении сыворотки 1:50 и выше говорит о её специфичности. 3. Наличие в сыворотке антител к бактериям (антигенам), близким по строению к изучаемым (так называемая групповая реакция). Например, сыворотка больного брюшным тифом может агглютинировать также бактерии паратифа А и В. В отличие от специфической, групповая реакция идёт в более низких титрах. Адсорбированные сыворотки освобождены от групповых антител и не дают групповой реакции. 4. Следует учесть, что специфические антитела после перенесённого заболевания и даже после прививок могут сохраняться длительное время. Они называются «анамнестическими». Чтобы отличить их от «инфекционных» антител, реакцию агглютинации ставят в динамике, т.е. исследуют сыворотку того же больного через несколько дней. Повышение титра антител говорит о наличии болезни - титр «анамнестических» антител не повышается, а может даже снизиться. Существуют два основных метода поведения этой реакции: реакция агглютинации на стекле (иногда их называют ориентировочной) и развернутая реакция агглютинации (в пробирках).
СХЕМА №1
Ориентировочная РА на стекле Развернутая РА (объемный метод)
Реакция коагглютинации Развернутая РА на стекле (сероидентификация) Реакция агглютинации на стекле. На обезжиренное предметное стекло наносят две капли специфической (адсорбированной) сыворотки и каплю изотонического раствора хлорида натрия. Неадсорбировнлиые сыворотки предварительно разводят в соотношении 1:5 - 1:100. Капли на стекло необходимо наносить так, чтобы между ними было расстояние. Культуру петлёй или пипеткой тщательно растирают на стекле, а потом вносят в каплю изотонического, раствора хлорида натрия и в одну из капель сыворотки, размешивая в каждой до образования гомогенной взвеси. Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является контролем сыворотки. Внимание! Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю изотонического раствора хлорида натрия, которая является контролем антигена. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 мин. Если контроль сыворотки остаётся прозрачным, в контроле антигена наблюдается равномерная муть, а в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья агглютината на фоне прозрачной жидкости, результат реакции считается положительным.
СХЕМА №2
Диагностическая Физиологический сыворотка +культура раствор + культура Развёрнутая реакция агглютинации (объемный метод). Готовят последовательные, чаще всего двукратные, разведения сыворотки. Метод называют объёмным. Для определения титра антител в сыворотке крови возьмите 6 пробирок. В первую пробирку налейте 1 мл исходного разведения сыворотки 1:50 и во все 6 пробирок градуированной пипеткой внесите по 1 мл физиологического раствора. В первой пробирке получится разведение сыворотки 1:100 при объёме 2 мл. Из первой пробирки 1 мл перенесите во вторую пробирку, где разведение станет 1:200. Так сделайте ряд последовательных разведений сыворотки в 5 первых пробирках (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Из пятой пробирки 1 мл вылейте в дезинфицирующий раствор. Во все 6 пробирок добавьте по 2 капли диагностикума. Шестая пробирка является контролем культуры, так как содержит только физиологический раствор и диагностикум. Такой контроль необходим для исключения спонтанной агглютинации культуры. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при температуре 37°С на 2 часа, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре, после чего производят учёт результатов реакции агглютинации. При постановке реакции агглютинации с сыворотками детей первых месяцев жизни в связи с функциональной неполноценностью антителообразования необходимо выявление более низких титров антител, что учитывается при разведении сыворотки. Исходное разведение сыворотки берут 1:25. В первой пробирке получают разведение 1:50, затем 1:100 и т.д.
СХЕМА №3
При положительном результате реакции в пробирках видны склеившиеся клетки в виде зерен или хлопьев на фоне прозрачной жидкости. Агглютинат постепенно оседает на дно в виде «зонтика», а жидкость над осадком просветляется. Контроль антигена равномерно мутный. По характеру осадка различают мелко- и крупнозернистую (хлопьевидную) агглютинацию. Мелкозернистая агглютинация получается при работе с О-сыворотками. Крупнозернистая - при взаимодействии подвижных микробов со жгутиковыми Н-сыворотками. Она наступает быстрее мелкозернистой, образующийся при этом осадок очень рыхлый и легко разбивается. Интенсивность реакции выражается следующим образом: ++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный; +++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный; ++ осадок еще меньше, жидкость мутнее. Результат реакции сомнительный; на дне пробирки незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции; - осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции.
Цель: 1. Определить родовую принадлежность выделенной чистой культуры в ориентировочной РА на стекле с поливалентными сыворотками: сальмонеллезной ABCDE, шигеллезной, иерсиниозной (сероиндикация). Поставить, учесть, оценить результат РА.
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ 2. Определить вид исследуемой культуры в развернутой РА на стекле с монорецепторными сальмонеллезными сыворотками: 09, 04, Ovi, 05, 012, 01, Hi, Hd HI,2 (сероидентификация). Поставить, учесть, оценить результат РА (см. теоретическую справку, таблицу №1).
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3. Учесть результат РА с бруцеллезным диагностикумом с целью выявления антител в парных сыворотках больного (серодиагностика). Парные сыворотки - это сыворотки от одного и того же больного, взятые в начале болезни и через одну две недели с целью выявления нарастания титра антител. Сделать вывод. (См. схему № 3).
2-неделя
1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Выполните задания для самоконтроля: Агглютинация-это__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Ингредиенты для постановки РА: 1.___________________________________________________________________________ 2.___________________________________________________________________________ 3.___________________________________________________________________________ Феномен реакции _____________________________________________________________ Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 529 | Нарушение авторских прав |
