 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
РЕАКЦИЯ ПАССИВНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ (РПА)Под РПА понимают реакцию, в которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях, которые при этом склеиваются. В качестве корпускулярных носителей применяют эритроциты животных, частицы латекса(полимерные микрошарики), бентонита, сефарозы, клетки St. aureus (штам Cowan-1, содержащий протеин А). Различают 3 типа РПА: 1)Различные варианты РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). 2)Р. коагглютинации 3)Р. латексаагглютинации. 1. РПГА – реакция пассивной гемагглютинации. В основе лежит агглютинация сенсибилизированных эритроцитов. РПГА, как правило подразумевает использование эритроцитов, сенсибилизированных АТ-ми. Эритроциты используются нативные и фиксированные (формальдегидом, глутаровым альдегидом, хлоридом хрома и др.); Ингридиенты реакции РПГА: 1)растворимый (высокодисперсный) АГ (белки, полисахариды и др.); 2)эритроциты (носитель); 3)АТ (испытуемая сыворотка или диагностическая иммунная сыворотка; обычно разводят в соотношении от 1:10 до 1:20480). 4)Изотонический раствор хлорида натрия. Реакцию инкубируют сначала при 37 градусах в течении 2 часов, затем при комнатной температуре в течении 18-24 часов. При положительной реакции, в результате образования комплекса (АГ-АТ) на поверхности эритроцитов, последние склеиваются и равномерно покрывают все дно пробирки или всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями. При отрицательной реакции скопление эритроцитов имеет вид меленького диска с ровными краями («пуговки»). Ставят контроли специфичности реакции с иммунной антисывороткой (положительная реакция) и нормальной сывороткой (отрицательная реакция). Контролем спонтанной агглютинации эритроцитов служат реакции со взвесью сенсибилизированных и несенсибилизированных эритроцитов в разведенной нормальной сыворотке. Недостатки: 1) Трудность стандартизации эритроцитов при изготовлении диагностикумов. 2) Небольшой срок хранения диагностикумов. Достоинства: 1) Простота и дешевизна. Эти СР широко применяются. Например, состояние иммунитета против дифтерии у детей и подростков проверяют с помощью РПГА с дифтерийным эритроцитарным диагностикумом (анатоксинным). Неиммунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мл. (1:20) Необходимые инградиенты: 1. Испытуемая сыворотка. 2. Диагностикум дифтерийный эритроцитарный 3. Физиологический раствор 4. Противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10МЕ/мл. 5. Полистироловые пластины (при их отсутствии – пробирки). Испытуемую сыворотку разводят физ. раствором от1:10 до 1:20480 в 12 лунках. Реакция ставится в объеме 0,8мл. Вносят по 1 капле диагностикума в каждую лунку. Противодифтерийную контольную сыворотку (с активностью 10МЕ/мл) разводят от 1:10 до 1:20480 и вносят также по 1 капле диагностикума. Оставляют при комнатной температуре на 3 часа (максимум на 15-20 часов) и читают реакцию. Учет реакции проводят по степени агглютинации эритроцитов, которую оценивают по 4-х кратной системе: ++++ - агглютинировавшие эритроциты ровным слоем выстилают все дно лунки, образуя по форме перевернутый купол; края купола иногда заворачиваются +++ - в верхней части агглютината отмечается узкое более широкое плотное кольцо; ++ - в верхней части аглютината более широкое плотное кольцо из эритроцитов, но меньшее по диаметру + - на дне лунки образуется широкое плотное кольцо из эритроцитов, но меньшее по диаметру - - на дне лунки имеются плотный диск или плотное широкое кольцо, но уменьшенного диаметра по сравнению с реакцией в +. Титром антитоксина в исследуемом матариале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию титра антитоксина испытуемой сыворотки. Расчет активности испытуемой сыворотки производят по формуле: Х=(10А)/В, где Х – активность испытуемой сыворотки в МЕ/мл. 10 – титр контрольной сыворотки в МЕ/мл. А – максимальное разведение испытуемой сыворотки с полож. результатом. В – максимальное разведение контрольной сыворотки с полож. результатом. 2. Реакция коагглютинации, латексаглютинации. Диагностикум содержит стафилококки для коагглютинации и частицы латекса для латексреакции, на поверхности которых находятся АТ-ла. В случае с фиксированными клетками стафилококка связывание АТ происходит за счет взаимодействия Fс-участками IgС с молекулами протеина А. При получении латексных диагностикумов используют химическое связывание АТ или АГ с полимерной основой частиц или взаимодействие, основанное на гидрофобных силах. Достоинства: простота постановки. Недостаток: возможность неспецифической агглютинации.
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 677 | Нарушение авторских прав |