РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ (РИА)
В качестве метки используются радиактивные изотопы (131I, 125 I, или 3 H и 14 C).
В зависимости от техники постановки выделяют два способа РИА.
1) Техника «жидкая фаза» (классический РИА).
Недостаток этой техники постановки – необходимость специального разделения свободного и связанного меченного антигенов (или антител).
2)Техника «твёрдая фаза»
АГ или АТ известной специфичности связываются на сорбентах (твёрдой фазе) – стенках полистироловой лунке или пластиковой пробирке. На иммобилизованный АГ (АТ) последовательно сорбируются остальные компоненты ИК.
В зависимости от характера реакции различают следующие методы:
1) Конкурентный метод – метод, основанный на конкуренции АГ.
Компоненты реакции:
а) определяемый АГ (исследуемый материал – кровь, мокрота и др.);
б) идентичный к исследуемому АГ-у антиген, меченый радиоизотопом;
в) специфические АТ-ла известной концентрации, связанные на сорбенте;
г) стандартный АГ (контрольный);
д) буферный раствор.
Сначала в реакцию вводят исследуемый АГ. Происходит образование комплекса АГ-АТ на поверхности сорбента. Сорбент отмывают, затем вводят меченый АГ. Чем больше содержание исследуемого АГ, тем меньше меченного АГ связывается с АТ-м на поверхности сорбента. Концентрацию меченного АГ определяют измерением радиоактивности реакции с помощью счетчиков. Величина радиоактивности реакции будет обратно пропорциональной количеству АГ в исследуемой пробе.
2) Неконкурентный метод.
Компоненты реакции:
а) определяемый АГ;
б) специфический АТ-а известной концентрации, связанные на сорбенте;
в) идентичные к связанному антителу антитела, меченые радиоизотопом;
г) стандартный АГ;
д) буферный раствор.
К связанным АТ добавляют исследуемый АГ. В процессе инкубации на сорбенте образуются комплексы АГ-АТ. Сорбент отмывают от свободных компонентов и добавляют меченые АТ, которые связываются со свободными валентностями АГ-на в составе комплекса. Величина радиоактивности пропорциональна концентрации исследуемого АГ.
3) «Сэндвич-метод» (непрямой метод) – наиболее распространённый метод.
Компоненты:
а) исследуемая сыворотка (или исследуемый АГ);
б) АГ-ы, связанные на сорбенте (или АТ-ла, связанные на сорбенте при определении АГ-а).
в) диагностические АТ против иммуноглобулинов, меченные радиоизотопами;
г) контрольные сыворотки (или АГ-ы)
д) буферные растворы
Исследуемые АТ-а (или АГ-ы) реагируют с твёрдофазными АГ-ми (АТ-ми), после чего инкубат удаляется и в реакцию вводят меченые антиглобулиновые АТ, которые связываются со специфическими комплексами АГ-АТ на поверхности сорбента. Величина радиоактивности реакции прямо пропорциональна количеству исследуемого АТ (или АГ).
Достоинтва РИА:
1) высокая специфичность и чувствительность
2) простота техники постановки
3) точность количественной оценки результатов.
4) легко поддаётся автоматизации
Недостаток: использование радиоактивных изотопов.
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 684 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |
|