АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ (РИА)

В качестве метки используются радиактивные изотопы (¹³¹I, ¹²⁵ I, или ³ H и ¹⁴ C).

В зависимости от техники постановки выделяют два способа РИА.

1) Техника «жидкая фаза» (классический РИА).

Недостаток этой техники постановки – необходимость специального разделения свободного и связанного меченного антигенов (или антител).

2)Техника «твёрдая фаза»

АГ или АТ известной специфичности связываются на сорбентах (твёрдой фазе) – стенках полистироловой лунке или пластиковой пробирке. На иммобилизованный АГ (АТ) последовательно сорбируются остальные компоненты ИК.

В зависимости от характера реакции различают следующие методы:

1) Конкурентный метод – метод, основанный на конкуренции АГ.

Компоненты реакции:

а) определяемый АГ (исследуемый материал – кровь, мокрота и др.);

б) идентичный к исследуемому АГ-у антиген, меченый радиоизотопом;

в) специфические АТ-ла известной концентрации, связанные на сорбенте;

г) стандартный АГ (контрольный);

д) буферный раствор.

Сначала в реакцию вводят исследуемый АГ. Происходит образование комплекса АГ-АТ на поверхности сорбента. Сорбент отмывают, затем вводят меченый АГ. Чем больше содержание исследуемого АГ, тем меньше меченного АГ связывается с АТ-м на поверхности сорбента. Концентрацию меченного АГ определяют измерением радиоактивности реакции с помощью счетчиков. Величина радиоактивности реакции будет обратно пропорциональной количеству АГ в исследуемой пробе.

2) Неконкурентный метод.

Компоненты реакции:

а) определяемый АГ;

б) специфический АТ-а известной концентрации, связанные на сорбенте;

в) идентичные к связанному антителу антитела, меченые радиоизотопом;

г) стандартный АГ;

д) буферный раствор.

К связанным АТ добавляют исследуемый АГ. В процессе инкубации на сорбенте образуются комплексы АГ-АТ. Сорбент отмывают от свободных компонентов и добавляют меченые АТ, которые связываются со свободными валентностями АГ-на в составе комплекса. Величина радиоактивности пропорциональна концентрации исследуемого АГ.

3) «Сэндвич-метод» (непрямой метод) – наиболее распространённый метод.

Компоненты:

а) исследуемая сыворотка (или исследуемый АГ);

б) АГ-ы, связанные на сорбенте (или АТ-ла, связанные на сорбенте при определении АГ-а).

в) диагностические АТ против иммуноглобулинов, меченные радиоизотопами;

г) контрольные сыворотки (или АГ-ы)

д) буферные растворы

Исследуемые АТ-а (или АГ-ы) реагируют с твёрдофазными АГ-ми (АТ-ми), после чего инкубат удаляется и в реакцию вводят меченые антиглобулиновые АТ, которые связываются со специфическими комплексами АГ-АТ на поверхности сорбента. Величина радиоактивности реакции прямо пропорциональна количеству исследуемого АТ (или АГ).

Достоинтва РИА:

1) высокая специфичность и чувствительность

2) простота техники постановки

3) точность количественной оценки результатов.

4) легко поддаётся автоматизации

Недостаток: использование радиоактивных изотопов.

Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 691 | Нарушение авторских прав