МЕТОДЫ ОЦЕНКИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА
1. Методы оценки Т-системы.
А.Количественная оценка.
Определение количества Т- лимфоцитов. Метод Е – розеткообразования (Е-РОК).
Принцип метода: на первом этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты. На втором этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют процент Т-лимфоцитов от общего числа. Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. Поэтому при добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т- лимфоцитами. Образующиеся при этом структуры называются розетками. Розеткообразующей считается клетка, окруженная с тремя и более эритроцитами. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом и количество розеток.
Б.Качественная (функциональная) оценка.
Б1. Оценка способности к пролиферациив реакции бластной трансформации лимфоцитов.
Принцип метода: Т- лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in vitro способны превращатся в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.
Б2. Определение количества Т-супрессоров, Т- хелперов и Т- киллеров в реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и ИФА.
Принцип РИФ: лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклональными антителами против отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем – меченой флюорохромом антиглобулиновой сывороткой. Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 2214 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |
|