АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Серийные разведения в плотных средах

Метод серийных разведений в плотных средах во многом аналогичен методу разведений в жидких средах, но определение МБК требует более сложных манипуляций. Готовят двойные серийные разведения препарата от 1:10 000 до 1:320 000, затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие по 4 мл (или 9 мл) охлаждённого до 45 °C агара. Процедуру проводят одной пипеткой с перенесением препарата от меньшей концентрации к большей. Содержимое пробирок можно быстро внести в чашки ПЌтри, либо пробирки «скЊшивают» до застывания агара. Затем агар засевают исследуемой стандартизированной тест-культурой (петлёй или специальным дозатором, засевающим чашку 36 видами различных микроорганизмов) и инкубируют 18–20 ч при 37 °C. После инкубации определяют МИК по отсутствию роста на чашках (пробирках), содержащих наименьшие концентрации препарата.

Диффузионные методы

Диффузионные методы менее точны, чем методы разведений, но более просты в исполнении и позволяют определять чувствительность к нескольким ЛС одновременно. Поэтому их чаще применяют на практике.

Исходный метод. Чашки ПЌтри заполняют питательной средой, соответствующей пищевым потребностям возбудителя, слоем в 4–5 мм. После застывания агар подсушивают в термостате при 37 °C в течение 20 мин. Посев тест-культуры можно осуществлять внесением в полуостывший агар, но чаще микробную взвесь наслаивают на агар. После равномерного распределения по поверхности излишки взвеси удаляют, а чашки подсушивают в термостате. В агаре пробивают лунки и в каждую вносят по 0,1 мл раствора исследуемых препаратов, после чего инкубируют 18 ч при 37 °C (срок инкубации может варьировать в зависимости от скорости роста микроорганизма). Активность учитывают, измеряя диаметр зоны подавления роста для каждого препарата.

Метод дисков. В настоящее время вместо классического (исходного) метода повсеместно применяют модификацию, предложенную КЋрби и БЊуэром и признанную стандартным тестом (рис. 9 – 13). После посева тест-культуры на агар наносят диски из фильтровальной бумаги, пропитанные различными антимикробными препаратами (используют коммерческие образцы, содержащие известные концентрации). После инкубации при 37 °C в течение времени, необходимого для роста выделенного возбудителя, проводят определение диаметра зоны торможения роста. Размеры зон, полученные в опыте, сравнивают с величинами зон задержки роста, указанными в инструкциях, прилагаемых к дискам, после чего выделенные микроорганизмы относят к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Ы Вёрстка. Вставить рисунок 9–13

Рис. 9 – 13. Метод дисков для стандартного определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным агентам. Диски из фильтровальной бумаги, пропитанные препаратами в известных концентрациях, нанесены на поверхность агара, засеянного тест-культурой. При наличии чувствительности к ЛС через 18 ч культивирования при 37 °С вокруг дисков образуются зоны задержки роста (указаны стрелками).

Определение способности к образованию †-лактамаз

Среди многочисленных методов наибольшее распространение получил †-лактамазный тест — метод с использованием дисков, пропитанных нитроцефином — цефалоспорином, изменяющим окраску диска при гидролизе антибиотика (рис. 9 – 14). После нанесения на колонию бактерий, продуцирующих †-лактамазы, диска с нитроцефином последний через 10 мин (для стафилококков через 60 мин) изменяет окраску с желтоватой на коричнево-малиновую.

Ы Вёрстка. Вставить рисунок 9–14

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 704 | Нарушение авторских прав