АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Серийные разведения в плотных средах

Прочитайте:
  1. Культивирование микробов на искусственных питательных средах. Свойства и состав искусственных питательных сред. Классификация искусственных питательных сред по назначению.
  2. Основные принципы выделения чистых культур микробов, культивируемых на искусственных питательных средах. Этапы выделения чистых культур этих микроорганизмов.
  3. Оценка плотных мышц, ответственных за поддержание позы (постуральных)
  4. Серийные разведения в жидких средах
  5. ЭФФЕКТ РАЗВЕДЕНИЯ КРОВЬЮ

Метод серийных разведений в плотных средах во многом аналогичен методу разведений в жидких средах, но определение МБК требует более сложных манипуляций. Готовят двойные серийные разведения препарата от 1:10 000 до 1:320 000, затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие по 4 мл (или 9 мл) охлаждённого до 45 °C агара. Процедуру проводят одной пипеткой с перенесением препарата от меньшей концентрации к большей. Содержимое пробирок можно быстро внести в чашки ПЌтри, либо пробирки «скЊшивают» до застывания агара. Затем агар засевают исследуемой стандартизированной тест-культурой (петлёй или специальным дозатором, засевающим чашку 36 видами различных микроорганизмов) и инкубируют 18–20 ч при 37 °C. После инкубации определяют МИК по отсутствию роста на чашках (пробирках), содержащих наименьшие концентрации препарата.

Диффузионные методы

Диффузионные методы менее точны, чем методы разведений, но более просты в исполнении и позволяют определять чувствительность к нескольким ЛС одновременно. Поэтому их чаще применяют на практике.

Исходный метод. Чашки ПЌтри заполняют питательной средой, соответствующей пищевым потребностям возбудителя, слоем в 4–5 мм. После застывания агар подсушивают в термостате при 37 °C в течение 20 мин. Посев тест-культуры можно осуществлять внесением в полуостывший агар, но чаще микробную взвесь наслаивают на агар. После равномерного распределения по поверхности излишки взвеси удаляют, а чашки подсушивают в термостате. В агаре пробивают лунки и в каждую вносят по 0,1 мл раствора исследуемых препаратов, после чего инкубируют 18 ч при 37 °C (срок инкубации может варьировать в зависимости от скорости роста микроорганизма). Активность учитывают, измеряя диаметр зоны подавления роста для каждого препарата.

Метод дисков. В настоящее время вместо классического (исходного) метода повсеместно применяют модификацию, предложенную КЋрби и БЊуэром и признанную стандартным тестом (рис. 913). После посева тест-культуры на агар наносят диски из фильтровальной бумаги, пропитанные различными антимикробными препаратами (используют коммерческие образцы, содержащие известные концентрации). После инкубации при 37 °C в течение времени, необходимого для роста выделенного возбудителя, проводят определение диаметра зоны торможения роста. Размеры зон, полученные в опыте, сравнивают с величинами зон задержки роста, указанными в инструкциях, прилагаемых к дискам, после чего выделенные микроорганизмы относят к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Ы Вёрстка. Вставить рисунок 9–13

Рис. 913. Метод дисков для стандартного определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным агентам. Диски из фильтровальной бумаги, пропитанные препаратами в известных концентрациях, нанесены на поверхность агара, засеянного тест-культурой. При наличии чувствительности к ЛС через 18 ч культивирования при 37 °С вокруг дисков образуются зоны задержки роста (указаны стрелками).

Определение способности к образованию †-лактамаз

Среди многочисленных методов наибольшее распространение получил †-лактамазный тест — метод с использованием дисков, пропитанных нитроцефином — цефалоспорином, изменяющим окраску диска при гидролизе антибиотика (рис. 914). После нанесения на колонию бактерий, продуцирующих †-лактамазы, диска с нитроцефином последний через 10 мин (для стафилококков через 60 мин) изменяет окраску с желтоватой на коричнево-малиновую.

Ы Вёрстка. Вставить рисунок 9–14


Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 697 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)