АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Изучение реакций окислительного фосфорилирования
Принцип метода. При окислении различных субстратов в дыхательной цепи высвобождается энергия, часть которой используется на реакцию окислительного фосфорилирования. Степень последнего (энергетическая ценность субстратов) определяется по убыли неорганического фосфата (коэффициент Р/О = 1,5 – 2,5). Используя различные субстраты (яблочная, янтарная, аскорбиновая кислоты) оцениваем степень окислительного фосфорилирования. Содержание фосфорной кислоты определяем в реакции с молибдатом аммония и редуцирующим раствором аскорбиновой кислоты по интенсивности окраски образующейся молибденовой сини.
Ход работы. В четыре пробирки вносят реактивы согласно схеме:
№ п/п
| Содержимое пробирок
| Контроль
| Опыт
| | |
|
|
|
| 1.
| Инкубационная смесь
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 2.
| Физиологический раствор
| 0,5
| —
| —
| —
| 3.
| Раствор яблочной кислоты
| —
| 0,5
| —
| —
| 4.
| Раствор янтарной кислоты
| —
| —
| 0,5
| —
| 5.
| Раствор аскорбиновой кислоты + цитохром с
| —
| —
| —
| 0,5
| 6.
| Суспензия митохондрий
| 0,5
| 0,5
| 0,5
| 0,5
| Инкубация 10 минут при комнатной температуре, затем добавляют:
| 7.
| Раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ)
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 8.
| Раствор молибдата аммония
| 0,5
| 0,5
| 0,5
| 0,5
| 9.
| Редуцирующий раствор Фиске и Субарроу
| 0,5
| 0,5
| 0,5
| 0,5
| 10.
| Содержимое всех пробирок разбавить водой в 8 раз
|
Инкубация 10 минут.
Результаты (интенсивность окраски по четырехбальной шкале):
Коэффициент Р/О:
Выводы:
Лабораторная работа № 2.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 684 | Нарушение авторских прав
|