АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Использование стандартной сыворотки для определения антигенов эритроцитов редкой специфичности методом конглютинации

С желатином в пробирках

Инструкция по применению

В пробирку к 1 капле сыворотки (0,05 мл) добавить 1 каплю испытуемых эритроцитов (0,05 мл) и 2 капли 10%-го желатина (0,1мл). Содержимое перемешать путем встряхивания.

Инкубировать в термостате при температуре +46 – +48°С в течение 45 минут или в водяной бане при температуре +46 – +48°С в течение 20 минут.

После прогревания в пробирку долить 3-5 мл изотонического раствора хлорида натрия, содержимое перемешать путем перевертывания пробирки.

Учет результатов исследования проводить с помощью микроскопирования, для чего 1 каплю содержимого из пробирки нанести пипеткой или стеклянной палочкой на предметное стекло и просмотреть при малом увеличении. Положительный результат реакции (наличие агглютинации) свидетельствует о наличии в эритроцитах соответствующего антигена.

В каждую серию исследований должны быть включены «положительный» (+) и «отрицательный» (-) контроли: эритроциты D+, D-, С+, С-, Е+, Е-, с+, с-, К+, К-.

Дополнение 2

Использование стандартной сыворотки для определения антигенов эритроцитов редкой специфичности методом конглютинации в сывороточной среде на чашках Петри (на плоскости) с подогревом

Инструкция по применению

На чашку Петри (пластмассовую пластинку) нанести 2 капли сыворотки (0,1 мл), добавить 1 каплю взвеси испытуемых эритроцитов (0,05 мл). Капли перемешать стеклянной палочкой.

Чашку Петри (пластинку) поместить в водяную баню +46 – +48°С на 10 минут.

Результат исследований просмотреть при легком покачивании чашки Петри (пластины), наблюдая за наличием или отсутствием агглютинации эритроцитов.

При положительном результате агглютинаты эритроцитов легко различимы на почти обесцвеченном фоне жидкости. При отрицательном результате капля остается равномерно окрашенной в красный цвет. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии на эритроцитах соответствующего антигена.

В каждую серию исследований должны быть включены «положительный» и «отрицательный» контроли: эритроциты D+, D-.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

УТВЕРЖДАЮ

Первый заместитель Министра

____________Р.А. Часнойть

13.11. 2008 г.

Регистрационный № 121-1108

ПРИГОТОВЛЕНИЕ КОНСЕРВИРОВАННЫХ

СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

В ИЗОСЕРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ

инструкция по применению

УЧРЕЖДЕНИЕ-РАЗРАБОТЧИК:

Государственное учреждение «Республиканский

научно-практический центр гематологии и

трансфузиологии»

АВТОРЫ:

д.м.н., профессор Потапнев М.П., к.м.н., доцент Свирновская Э.Л.,

Дворина Е.М., Будько Т.В., Полкова Е.В.

Минск, 2008

Стандартные эритроциты, содержащие определенные сочетания аллоантигенов, предназначены для выявления антиэритроцитарных антител в сыворотке ис­следуемой крови, при определении групп крови АВ0 перекрестным способом, для контроля при определении резус-принадлежности крови, а также для проведения контроля специфичности и активности изготавливаемых стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВ0, сывороток антирезус, стандартных сывороток и реагентов, предназначенных для определения различных систем антигенов эритроци­тов крови человека.

С целью увеличения срока годности стандартных эритроцитов можно произво­дить их консервирование специально изготовленными консервирующими раство­рами.

I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам

Стандартные эритроциты для исследований по системе АВ0 должны давать четкую, хорошо видимую агглютинацию при взаимодействии со стандартными сыворотками соответствующей специфичности и не давать агглютинации с сыво­ротками, не содержащими антител против данного антигена эритроцитов.

Стандартные эритроциты группы А(II), предназначенные для выявления изогемагглютинина a, должны иметь титр не ниже 1:64. Стандартные эритроциты группы B(III), пред­назначенные для выявления изогемагглютинина b, также должны иметь титр не ниже 1:64.

Титр антигенов А и В устанавливается с помощью стандартных изогемагглютинируюших сывороток группы A_b(II) (анти-В) и В_a(III) (анти-А) или соответствую­щих моноклональных антител анти-А и анти-В, удовлетворяющих требованиям действующих инструкций.

Время наступления агглютинации эритроцитов A₁ и В со стандартными изогемагглютинирующими реагентами должно составлять не более 5 секунд, эри­троцитов подгруппы A₃, В ₂ - не более 2 минут.

Стандартные эритроциты группы крови 0(I) с этими реактивами не должны давать агглютинации в течение 20 минут.

Стандартные эритроциты группы крови 0(I), предназначенные для выявления в исследуемой сыворотке антиэритроцитарных антител и установления их специфичности, должны содер­жать антигены системы Резус: D, С, С^W , с, Е, е в различных сочетаниях, антигены систем Келл, Даффи, Кидд, М, N, S, s, Le, обеспечивающие выявление клинически значимых антител, и давать с соответствующими реактивами четкую агглютинацию при определении методом конглютинации с желатином, экспресс-методом в про­бирках или на плоскости без подогрева или непрямой пробе Кумбса, в зависимос­ти от того, для какого метода исследования предназначен используемый реактив.

Резус-отрицательные стандартные эритроциты 0(I) фенотипа ccddee не долж­ны давать агглютинации с реагентами антирезус, содержащими антитела анти-D, анти-С, анти-Е во всех методах исследования, для использования в которых пред­назначены указанные реагенты антирезус.

Время наблюдения за отрицательной реакцией должно соответствовать вре­мени, установленному для каждой из этих реакций.

II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов

Приготовление стандартных эритроцитов производится в условиях строгого соблюдения асептики и состоит из приготовления консервирующего раствора, по­лучения взвеси эритроцитов в консервирующем растворе, розлива эритроцитов, маркировки продукции и контрольных исследований.

1. Приготовление консервирующего раствора для стандартных эритроцитов

Консервирующей средой для приготовления стандартных эритроцитов могут служить растворы: консервант №1, если эритроциты предназначены для определения групп крови системы АВ0, или консервант №2, если эритроциты предназначены для выявления антиэритроцитарных антител, установления их специфичности, стандартизации аллоиммунных сывороток (рецептура приведена ни­же).

В случае необходимости доведения рН растворов до требуемых величин до­бавляют несколько кристаллов аскорбиновой кислоты или Na₂HP0₄ ^.12H₂O.

Дата добавления: 2015-11-28 | Просмотры: 690 | Нарушение авторских прав