АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Комплемент
Комплемент представляет собой систему сывороточных белков. Известно не менее 18 белков, составляющих систему комплемента. Восемь из них являются индивидуальными белками, а один представляет комплекс: 4 белка системы пропердина, один — ингибитор фермента активатора. Согласно номенклатуре, принятой ВОЗ, система комплемента обозначается символом С, а ее индивидуальные компоненты символами Cl, C2 и т. д.
Каждая белковая фракция обладает определенными свойствами. Комплемент находится в сыворотке крови различных животных и человека, но наибольшее его количество обнаружено в сыворотке крови морских свинок, поэтому в практике препарат «комплемент» отождествляется с сывороткой морской свинки. В норме фракции комплемента находятся в неактивном состоянии. Они становятся активными в процессе многоступенчатых превращений, разделяемых на классический и альтернативный пути активации.
При классическом пути начальным активатором комплемента является комплекс антиген-антитело. Активируют систему комплемента IgM и большинство подклассов IgG (IgG1, 3) в большей степени, IgG2 — в меньшей.
При альтернативном пути активаторами являются полисахариды, в том числе зимозан и инулин, липополисахариды (эндотоксины), агрегаты – IgA. Дальнейший ход активации аналогичен классическому пути. (Схема 2)
В активном состоянии комплемент участвует в специфических иммунологических реакциях организма, при бактериолизе, ускоряет специфическую агглютинацию, преципитацию, усиливает, фагоцитоз, участвует в реакциях нейтрализации.
Активированные компоненты комплемента действуют в определенном порядке — в виде каскада ферментов, при этом продукт предшествующей реакции служит катализатором для включения в последующую реакцию компонента и субкомпонента. Комплемент является важным фактором гомеостаза и регулируется механизмами последнего.
Комплемент отличается от иммуноглобулинов тем, что его концентрация в сыворотке крови не повышается в результате иммунизации.
Содержание и уровень комплемента в крови можно использовать как тест, характеризующий состояние естественной резистентности макроорганизма: высокое содержание комплемента в крови считается благоприятным признаком; снижение уровня комплемента является отрицательным прогностическим показателем.
Для определения титра комплемента исследуемую сыворотку разводят и добавляют гемолитическую систему (смесь равных объемов эритроцитов барана и гемолитической сыворотки).
Таблица 10
Схема титрования комплемента
| пробирки
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| 1. Исследуемая сыворотка (1:10), мл
| 0,05
| 0,1
| 0,15
| 0,2
| 0,25
| 0,3
| 0,35
| 0,4
| 0,45
| 0,5
| –
| 2. Физ. раствор, мл
| 1,45
| 1,4
| 1,35
| 1,3
| 1,25
| 1,2
| 1,15
| 1,1
| 1,05
| 1,0
| 1,5
| 3. Гемолитическая система, мл
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| 1,5
| Пробирки инкубируют при 37°С 30 минут, встряхивая каждые 10 минут (табл. 10). Для контроля готовят разведения эритроцитов и дистиллированной воды: 0,1мл + 2,9мл (соответствует 20% гемолизу); 0,25мл + 2,75мл (соответствует 50% гемолизу); 0,35мл + 2,65мл (соответствует 70% гемолизу).
После инкубации содержимое пробирки центрифугируют при 1500 об/мин 5 минут и определяют пробирку, соответствующую 50% гемолизу. Количество комплемента, внесенное в эту пробирку, делят на исходное разведение и узнают какое количество неразведенной сыворотки дает этот феномен. Эта величина будет соответствовать 1 единице СН50. Вычисляют, сколько таких единиц будет в 1 мл неразведенной сыворотки.
Схема 2. Пути активации и физиологические функции компонентов
комплемента
Пропердин
В 1954 году Л. Пилломер обнаружил сывороточный фактор, который, как тогда считалось, активирует С3 и является центральным звеном альтернативного пути активации комплемента. Он был назван пропердином. Вскоре были обнаружены еще два дополнительных сывороточных белка – В и D. Вместе с компонентами комплемента С5 – С9 они были объединены в пропердиновую систему. Действительная роль пропердина (Р) в альтернативном пути активации оказалась иной. Он является стабилизатором комплекса С3ВВ (схема3).
Схема 3. Роль пропердина в альтернативном пути активации комплемента
Фактор В – протеиназа, Мм – 95 кD,
Фактор D – гликопротеин, Мм – 25 кD,
Фактор Р – g-глобулин, Мм – 220 кD.
Тем не менее, содержание пропердина в сыворотке крови в определенной степени, коррелирует с уровнем ее бактерицидной активности. В силу этого определение содержания пропердина в сыворотке крови больных продолжает использоваться в практике.
О количестве пропердина в испытуемой сыворотке судят по степени сорбции комплемента на комплексе зимозан-пропердин. Чем больше в сыворотке пропердина, тем интенсивнее будет связываться этим комплексом комплемент.
Методика: опыт ставится в двух пробирках. Опытная содержит испытуемую сыворотку, зимозан и комплемент. Контрольная — только испытуемую сыворотку и комплемент. Пробирки инкубируют при 37°С 60 мин. Далее в обеих пробирках по общепринятой методике титруют комплемент. Титр комплемента в контрольной пробирке показывает, какое количество комплемента было в опытной пробирке до образования комплекса пpoпердин-зимозан. Титрование же комплемента в опытной пробирке показывает какое количество осталось несвязанным после образования этого комплекса. По разнице полученных единиц можно судить о количестве комплемента, связанного комплексом пропердин—зимозан. За одну единицу пропердина принимается его количество, которое полностью связывает весь комплемент в 1 мл сыворотки.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 790 | Нарушение авторских прав
|