АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Химическое исследование.

Химическое исследование предусматривает определение белка, постановку реакций Панди и Нонне—Апельта для определения глобулинов и пробы Ланге.

Определение белка. Нормальное содер­жание белка колеблется от 0,15 до 0,3 г/л.

Количественное определение белка в спинномозговой жидкости.

Принцип. При добавлении сульфосалициловой кисло­ты к раствору, содержащему белок, образуется помутне­ние, интенсивность которого пропорциональна количеству белка.

Реактивы: 1) 1,6 % раствор сульфосалициловой кислоты; 2) 14% раствор безводного сульфата натрия; 3) рабочий раствор: свежеприготовленная смесь равных объемов реактивов 1 и 2; 4) 1 % стандартный раствор аль­бумина; 5) изотонический раствор хлорида натрия.

Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл спинномозговой жидкости. Содержимое пробир­ки тщательно перемешивают. Спустя 10 мин проводят из­мерения на ФЭКе при длине волны 410—480 нм (сине- фиолетовый светофильтр) в кювете с расстояниями между рабочими гранями 10 мм (1 см) против контроля (0,5 мл спинномозговой жидкости и 5 мл изотонического раствора хлорида натрия). Расчет ведут по калибровочному гра­фику. Для построения калибровочного графика из стан­дартного раствора готовят разведения и обрабатывают их как опыт.

Реакция Панди.

Реактив Панди. На техничес­ких весах взвешивают 80—100 г фенола; приготовленную навеску растворяют в 1 л дистиллированной воды, тща­тельно размешивают, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 24 ч, периодически взбал­тывая; затем раствор выдерживают еще 5—6 сут при комнатной температуре. Реактивом служит надосадочная жидкость.

Ход определения. 1 мл реактива помещают на часовое стекло, установленное на черном фоне. На реактив (по краю его или в центр) наслаивают 1—2 капли исследуемой спинномозговой жидкости. Реакцию учитывают через 3 мин. В зависимости от степени по­мутнения реакцию обозначают цифрами: 1 — слабая опалесценция; 2 — заметная опалесценция; 3 — умерен­ное помутнение; 4 — интенсивное помутнение с выпаде­нием хлопьев. Между количеством белка и степенью по­мутнения установлена прямая пропорциональная зави­симость. На основании этого

разработана методика разве­дения спинномозговой жидкости для последующего опре­деления в ней количества белка. Так, при положитель­ной оценке реакции на I жидкость разводят в 10—15 раз, на 2 — в 15—25 раз, на 3 — в 25—30, на 4 — в 35—70 раз. При появлении интенсивного помутнения и плотных белых хлопьев по всему реактиву ее раз­водят в 70—100 раз и более. При отрицательной реак­ции на 50 % азотную кислоту наслаивают неразведенную спинномозговую жидкость.

Реакция Нонне — Апельта.

Принцип. Спинномоз­говая жидкость мутнеет при смешивании с равным коли­чеством насыщенного раствора сульфата аммония.

Реактив. Насыщенный раствор сульфата аммония растворяют в 1 л горячей дистил­лированной воды. Раствор подогревают до кипения, взбалтывают до полного растворения, оставляют стоять на несколько дней при комнатной температуре, затем фильтруют. Реакция реактива должна быть нейтраль­ной (рН 7,0). При кислой реакции реактив доводят до рН 7,0 крепким раствором аммиака, прибавляя его по каплям.

Ход определения. В про­бирку наливают 0,5 мл спинномозговой жидкости и на­слаивают на него равный объем реактива. Затем со­держимое пробирки несколько раз встряхивают. В кон­трольную пробирку наливают 1 мл дистиллированной воды (пробирка должна быть такого же диаметра). Через 3 мин после смешения жидкости с реактивом опытную пробирку располагают рядом с контрольной на черном фоне и учитывают результаты.

Учет результатов проводят точно так же, как при реакции Панди.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 522 | Нарушение авторских прав