АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Прижизненные гельминтологические исследования

1. Копроовоскопические исследования

1.1 Методы флотации

В основе методов флотации (всплывания) лежит разность удельного веса флотационного раствора и яиц гельминтов, удельный вес флотационного раствора выше, в результате яйца гельминтов всплывают на поверхность жидкости и обнаруживаются в поверхностной пленке.

Необходимые реактивы и оборудование: один из флотационных растворов, ареометр, проволочная петля (из нескольких круглых петель диаметром от 0,5 до 1 см), предметные стекла (обезжиренные), пипетки стеклянные, химические стаканчики емкостью 30-50 мл, кюветы эмалированные, чашки Петри, стеклянные или деревянные палочки, спиртовка.

Подготовка к работе.

Приготовление флотационного раствора (по одной из нижеописанных прописей).

1) Раствор нитрата аммония NH₄NO₃ (гранулированной или обычной селитры) плотностью 1,3 готовят из расчета 1500 г вещества на 1 л горячей воды.

2) Раствор нитрата натрия NaNO₃ или азотнокислого натрия (предложенный автором Калантарян) с плотностью 1,38-1,4 готовят из расчета 1000 г вещества на 1 л горячей воды.

3) Раствор тиосульфата натрия Na₂S₂O₃×5H₂O (гипосульфита натрия) с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 г вещества на 1 л горячей воды.

4) Раствор сульфата натрия Na₂SO₄ или английской соли с плотностью 1,26-1,28 готовят из расчета 920 г вещества на 1 л горячей воды.

5) Насыщенный раствор хлорида натрия NaCl (поваренной соли) с плотностью 1,18- 1,2 (предложенный автором Фюллеборном) готовят из расчета 400-420 г соли на 1 л кипящей воды.

Любую из выше предложенных солей растворяют в горячей воде в эмалированной посуде, причем кладут соль в емкость с горячей водой порциями при подогревании на плите и постоянном перемешивании до полного растворения. Удельный вес флотационных растворов измеряется ареометром только после остывания раствора при комнатной температуре. Измерение удельного веса флотационного раствора ареометром строго обязательно, т.к. приготовление раствора по прописи не гарантирует получение нужного удельного веса (например, когда используемая соль недостаточно химически чистая). Фильтровать приготовленные растворы не обязательно. Если раствор приготовлен в большом количестве, то в последующие дни перед исследованием его подогревают с размешиванием осадка и после остывания раствора снова измеряют ареометром удельный вес.

Подготовка предметных стекол: предметные стекла обязательно обезжирить, например в смеси Никифорова (равные части этилового спирта и эфира).

Ход исследования

- В химический стаканчик объемом 30-50 мл налить немного одного из выше описанных флотационных растворов (стаканчик лучше предварительно поставить в чашку Петри).

- Поместить в стаканчик 2,5 г фекалий (объем с большой "боб").

- Тщательно размешать палочкой (индивидуальной для каждого образца).

- Удалить сразу же после размешивания всплывшие крупные частицы палочкой (или ложечкой с дырочками).

- Одновременно добавлять постепенно солевой раствор до 50 мл.

- При снятии поверхностной пленки предметным стеклом, стекло должно соприкасаться с жидкостью, поэтому стаканчик накрывается предметным стеклом, а флотационный раствор добавляется пипеткой до полного соприкосновения с предметным стеклом.

- Оставить взвесь на несколько мин, экспозиция зависит от того какой флотационный раствор применяется: при применении прописи № 1 и 5 - экспозиция 30-60 мин; № 2, 3, 4 - 30 мин.

- После вышеуказанной экспозиции снять предметное стекло с химического стаканчика, перевернув кверху ту его поверхность, которой оно соприкасалось с жидкостью, и положить сухой поверхностью на стекло большего размера.

- Микроскопировать без покровного стекла при увеличении: объектив × 8, ×10, окуляр ×7, ×10, для уточнения морфологического строения - окуляр ×40.

- При снятии поверхностной пленки проволочной петлей (лучше использовать петли с несколькими ячейками) целесообразно исследовать не менее 8 капель. Микроскопировать под покровным стеклом (можно и без покровного стекла, предварительно на предметное стекло нанеся каплю глицерина, в которой размазывают каплю с петли).

- Петли перед и после исследования обжигать на пламени спиртовой горелки.

Целесообразнее использовать для снятия пленки предметные стекла, т.к. это наиболее просто в применении и площадь снятия поверхностной пленки значительно увеличивается.

Эффективность метода: Наиболее эффективны методы флотации для обнаружения яиц нематод и цестод. Наиболее эффективно использование флотационного раствора с удельным весом 1,38-1,40 (всплывают и неоплодотворенные яйца аскарид). Неэффективен для выявления яиц трематод.

Применение метода: Для обнаружения яиц гельминтов кишечника.

1.2 Уксусно - эфирный метод (седиментация)

Необходимые реактивы и оборудование: водный раствор уксусной кислоты 5%-ный (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл дистиллированной воды); раствор Люголя 1%-ный; этиловый эфир медицинский; центрифужные градуированные пробирки с пробками; воронки стеклянные; бинт; предметные и покровные стекла; палочки деревянные и стеклянные; пипетки; микроскоп; центрифуга на 3000 об/мин.

Ход исследования:

- В центрифужные градуированные пробирки налить 5 мл 5%-ного раствора уксусной кислоты.

- Добавить 1 г фекалий (количество фекалий, чтобы раствор в пробирке поднялся до 6 мл).

- Фекалии тщательно смешать с уксусной кислотой при помощи палочки (индивидуальной для каждого образца), закрыть пробирку пробкой и интенсивно встряхнуть до образования однородной смеси и дать постоять 1 мин.

- Процедить через воронку с двухслойным бинтом в другую центрифужную пробирку (чтобы в новой пробирке процеженного раствора снова было 6 мл, если меньше, то дополнительно можно сполоснуть 5%-ным раствором уксусной кислоты воронку с бинтом, через который процеживали суспензию фекалий).

- Добавить в эту пробирку 4 мл эфира, т.е. до метки 10 мл, закрыть пробкой и энергично встряхивать в течение 30 с, держа при этом пробирку в горизонтальном положении (встряхивать в вытяжном шкафу, придерживая пробку), до получения эмульгированной смеси.

- Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 1 мин или в течение 2 мин при 1500 об/мин.

- После центрифугирования в пробирке различают 4 слоя: в верхней части пробирки эфирный экстракт, образовавшаяся "каловая пробка", раствор уксусной кислоты и на дне небольшой осадок. Уксусная кислота эмульгирует фекалии, проникает в непереваренные частицы, состоящие преимущественно из клетчатки; удельный вес смеси эфира с уксусной кислотой меньше удельного веса воды, поэтому фекалии вместе с неперевареными крупными частицами клетчатки поднимаются в виде пробки в верхнюю часть пробирки, а яйца гельминтов и цисты простейших, обладающие большим удельным весом, выпадают в осадок.

- "Каловую пробку" круговым движением палочки отделить от стенок пробирки и вместе с надосадочной жидкостью вылить, при этом излишки влаги удалить ватным тампоном с края пробирки, оставив на дне осадок.

- Осадок (как правило, небольшой, бесцветный) нанести на предметные стекла пипеткой или непосредственно из пробирки, капли должны быть небольшими — 50 мкл, по 2 капли на одном предметном стекле.

- Перед исследованием на цисты простейших в одну из капель осадка внести каплю 1%-ного раствора Люголя.

- Обе капли накрыть покровным стеклом (осадок не должен выступать за края стекла или затекать на покровное стекло).

- Каплю с раствором Люголя исследуют на цисты и ооцисты простейших, а каплю без Люголя исследуют на яйца и личинки гельминтов.

- Микроскопировать: на яйца и личинки гельминтов при увеличении - объектив ×8 или ×10, окуляр ×7 или ×10, для уточнения морфологического строения яиц гельминтов - объектив ×40; на цисты простейших - объектив ×40.

- Подсчитывают количество яиц и личинок гельминтов каждого вида, количество цист простейших.

Эффективность метода: Эффективно выявляет инвазии с высокой, средней и низкой интенсивностью. Применяется для выявления яиц, личинок гельминтов кишечника и печени, цист и ооцист простейших кишечника, т.к. 5%-ный раствор уксусной кислоты не оказывает деформирующего воздействия на цисты и ооцисты простейших (при исследовании оформленных и неоформленных фекалий), но не сохраняет стадии трофозоитов. Не снижает эффективности при использовании фекалий из консервантов.

Применение метода: Применяется как универсальный метод диагностики кишечных и печеночных гельминтозов и протозоозов. Используется как специальный метод для диагностики трематодозов, включая описторхоз. Используется как количественный метод исследования.

Паразитологическая обстановка может служить индикатором состояния популяций. При этом о неблагополучии популяции хозяев будут свидетельствовать резкое обеднение видового состава и видового разнообразия паразитов, изменение численности и смена доминирующих видов, изменение показателей зараженности обычных паразитов, характер распределения паразита в популяции, изменение локализации паразита в организме хозяина.

Паразитологические параметры

Показатели зараженности. Экстенсивность инвазии. Интенсивность инвазии. Средняя интенсивность инвазии. Индекс обилия.

Видовое разнообразие. Индекс видового разнообразия. Индекс доминирования.

Тип распределения паразитов. Степень агрегированности паразитов.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 366 | Нарушение авторских прав