 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
САМОСТОЯТЕЛЬНЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫРабота 1 Цель: Освоить бактериологический метод диагностики. Задача. В бактериологическую лабораторию поступил исследуемый материал (испражнения) от больного с предварительным диагнозом: «Пищевая токсикоинфекция?». При микроскопии материала обнаружены грамположительные кокки и грамотрицательные палочки. Выделите чистые культуры микроорганизмов, проведите их идентификацию. Определете этиологию пищевой токсикоинфекции. Методика: Все этапы бактериологического метода условно осуществляются в течение одного занятия: студент выполняет манипуляции очередного этапа, относит материал в термостат и сразу получает готовый результат для выполнения следующего этапа исследования. 1. Посев исследуемого материала на агар в чашке Петри методом механического разобщения с целью получения отдельных колоний (1-ый день). Простерилизованной в пламени горелки и охлажденной петлей берут материал для посева и вносят в чашку, слегка приоткрыв крышку. На поверхности питательной среды материал распределяют петлей следующим образом: у края чашки частыми штрихами образуют овальную площадку, на которой остается значительная часть материала, затем проводят параллельные штрихи на расстоянии 0,5 см от одного края чащики к другому. При посеве петлю следует держать параллельно агару, чтобы не царапать его (рис.2.2.а). После рассева петлю вынимают из чашки и немедленно обжигают в пламени, одновременно закрывая чашку Петри крышкой. Чашку маркируют и помещают вверх дном в термостат на сутки. 2. Изучение культуральных свойств выросших колоний (2-ой день). Через сутки при правильном посеве на последних штрихах вырастают отдельные колонии (рис.2.2.б). Дифференцируют разные типы колоний по величине, цвету (Рис. 2.3.а), форме, прозрачности, характеру поверхности (гладкая, шероховатая) и края (ровный, зазубренный) (рис.2.3.б). Из материала части колоний готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Остаток изучаемой колонии отсевают петлей в пробирку на скошенный питательный агар для получения чистой культуры. Посев ставят в термостат на сутки. 3. Идентификация выделенной чистой культуры (3-ий день). Через сутки выросшую чистую культуру идентифицируют по основным видовым признакам. Изучают морфологию при микроскопии мазка из чистой культуры. Осуществляют посев чистой культуры на дифференциально-диагностические тест-системы (стафитест, энтеротест) для изучения биохимической активности. Для этого готовят 1-миллиардную взвесь бактерий в физиологическом растворе, затем дозаторными или пастеровскими пипетками вносят 0,1 мл взвеси в лунки тест-системы. Планшет относят в термостат на сутки. 4. Определение вида выделенных микроорганизмов (4-ый день). Через 24 часа оценивают результаты биохимической активности по изменению цвета индикатора в лунке и сопоставляют их с дифференцирующими таблицами тест-системы. По результатам изучения свойств выделенных чистых культур определяют виды микроорганизмов, что является одной из конечных целей бактериологического метода диагностики. Используют определитель Берджи. Результат выполненной работы оформляют в виде протокола исследования.
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ: Цель:
Вывод: (ответить на вопросы: 1. Виды выделенных микроорганизмов (латинская транскрипция). 2. Можно ли на основании полученных результатов сделать заключение об этиологии ПТИ? Почему?).
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ И ОТВЕТЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ ВО ВНЕУЧЕБНОЕ ВРЕМЯ
ПИСЬМЕННОЕ ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ ВО ВНЕУЧЕБНОЕ ВРЕМЯ
В тетради для практических занятий составить и заполнить таблицу. Таблица. Характеристика этапов бактериологического метода диагностики инфекционных заболеваний.
ЗАНЯТИЕ 3 ТЕМА: Генетика бактерий. ЦЕЛЬ: 1. Изучить особенности строения бактериального генома. 2. Ознакомиться с основными формами изменчивости микроорганизмов. 3.Усвоить принципы генной диагностики инфекционных заболеваний.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА. Генетика микроорганизмов – одно из наиболее актуальных и перспективных направлений микробиологической науки. Генетический контроль в бактериальной клетке осуществляют ДНК нуклеоида и ДНК плазмид. Передача генетического материала осуществляется по наследству (вертикально) от материнской клетки дочерним при бинарном делении, а также между отдельными особями в бактериальной популяции (горизонтально). Основными механизмами генотипической изменчивости бактерий являются мутации и рекомбинации. Мутации являются следствием изменений в первичной структуре ДНК бактериальной клетки, бывают спонтанными и инцуцированными. Рекомбинации включают перенос генетического материала от клетки-донора клетке-реципиенту. В зависимости от механизма рекомбинаций выделяют: конъюгацию – передачу генетической информации от клетки-донора (F+) клетке-реципиенту (F-) через конъюгативный канал; трансформацию – активное включение донорского генетического материала клеткой-реципиентом из субстрата; трансдукцию – перенос генетического материала от донора реципиенту с помощью бактериофага. Изучение генетического аппарата микроорганизмов, форм и механизмов генетической изменчивости определило развитие прикладной науки – генной инженерии, основными задачами которой на современном этапе являются: создание новых вакцин, производство гормональных и ферментных препаратов, разработка современных молекулярно-генетических методов диагностики. В основе методов молекулярной гибридизации (ДНК-зонд, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и др.) лежит способность однонитчатой ДНК (зонд, праймер) достраиваться и взаимодействовать по принципу комплементарности с ДНК искомого возбудителя при ее наличии в исследуемом материале. ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ: 1. Строение бактериальоного генома. 2. Плазмиды и их роль в жизнедеятельности бактерий. 3. Модификации и мутации бактерий. Практическое использование (популяционный анализ). 4. Рекомбинативная изменчивость - механизмы трансформации, трансдукции, конъюгации. 5. Генная инженерия в медицинской микробиологии. Цели.Задачи.
ПЛАН САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ 1. Изучение плазмидных признаков бактерий (демонстрация) (Работа 1) 2. Изучение механизмов генотипической изменчивости: трасформации и трансдукции (Работа 2). 3. Изучение методов генной диагностики (ПЦР, ДНК-зонд) по таблице «Методы генной диагностики»
САМОСТОЯТЕЛЬНЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ
Работа 1 Цель: Изучить плазмидные признаки бактерий на примере антилизоцимной активности (АЛА). Задача. У кишечных палочек, выделенных из организма человека и из водопроводной воды (в условиях эксперимента после 2-х недельного инкубирования)) было определено наличие антилизоцимной активности. Оцените полученные данные. Ответьте на поставленные вопросы. Методика. Для определения бактерий с АЛА-признаком в плотную питательную среду добавляют необходимое количество лизоцима, затем на поверхность засевают в виде бляшек исследуемые бактерии, а через сутки после обработки хлороформом наносят второй слой агара с тест-штаммом микрококка, чувствительного к лизоциму. Учет проводят по росту микрококка над культурами, инактивировавшими лизоцим.
Протокол исследования: Цель…
Вывод: (Ответить на вопросы: Почему у штаммов кишечных палочек из водопроводлной воды отсутствует АЛА-признак?) Работа 2 Цель: Воспроизвести явление трансформации. Методика. 1. Для воспроизведения явления трансформации берут штаммы стафилококка, чувствительного (культура-реципиент) и устойчивого (культура-донор) к стрептомицину. 2. Культура-донор помещается в специальный лизирующий буфер для выделения чистой ДНК. 3. Культуру- реципиент помещают в буферный раствор с выделенной ДНК и инкубируют в термостате в течение суток. 4. Проводят высевы на селективные среды, содержащие стрептомицин из контрольных и опытной пробирок. 5. Посевы инкубируют в течение суток в термостате. Схема опыта.
контроль 1 опыт контроль 2
Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 1217 | Нарушение авторских прав |
1.Культура - реципиент
2.ДНК культуры-донора
Среда со стрептомицином