В изучении состояния метилирования эукариотических ДНК важную роль сыграло обнаружение двух рестриктаз Hpa II и Msp I, узнающих одну и ту же тетрануклеотидную последовательность CCGG, однако по-разному реагирующих на состояние метилирования внутреннего остатка С. Метилирование этого остатка за-
щищает последовательность от расщепления Hpa II, но не MspI, благодаря чему удается легко тестировать метилирование определенной части динуклеотидных сайтов CpG, входящих в состав узнаваемых этими рестриктазами четверок - CCGG. Так, абсолютно неметилированная ДНК характеризуется одним и тем же
Рис. 16.14. Обнаружение метилированных последовательностей CCGG в ß-глобиновом гене кролика. При расщеплении Eco RIобразуется протяженный фрагмент, содержащий большую часть ß-глобинового гена, включая оба интрона (показаны белым) и 5'-фланкирующую последовательность. Этот фрагмент после электрофореза и переноса по Саузерну регистрируется по гибридизации с радиоактивным зондом (слева). Расщепление этого фрагмента рестриктазой MspI происходит независимо от степени метилирования содержащихся в нем последовательностей CCGG (середина). Характер расщепления этого же фрагмента рестриктазой Hpaïl позволяет выявить уровень тканеспецифичного метили-
рования CCGG-последовательностей (справа). Данный фрагмент в составе ДНК спермы полностью метилирован, о чем говорит его абсолютная нечувствительность к действию Hpa II. В то же время этот фрагмент, содержащийся в ДНК, полученной из культуры кроличьих клеток, неметилирован и в одинаковой степени подвержен расщеплению Msp I и Hpa II. При изучении ДНК из клеток мозга и печени обнаруживается профиль расщепления, представляющий собой смесь тех, что изображены на рисунке слева и в середине. Таким образом в этих клетках имеет место неполное метилирование соответствующих последовательностей. (По Razin Α., Riggs A.D., 1980. Science, 210, 604.)
