(см. гл. 9). В качестве зонда для локализации искомых рестрикционных фрагментов после электрофореза используют клонированные радиоактивно меченные фрагменты соответствующих генов. Обработка ДНКазой I не приводит к изменению положения рестрикционного фрагмента ДНК на электрофореграмме, поскольку точки расщепления ДНКазой I случайным образом распределены по обеим цепям ДНК. Если участок ДНК оказывается доступен действию ДНКазы I (как в случае участка, комплементарного зонду 2, рис. 16.11), то при увеличении
концентрации ДНКазы количество фрагмента в пробе и интенсивность сигнала на радиоавтограмме падают. Такое поведение характерно для транскрипционно активных областей ДНК. Участок ДНК, фрагмент которого гибридизуется с зондом I, ведет себя в данных экспериментах аналогично участкам, расположенным в неактивной области ядерной ДНК: количество фрагмента с увеличением концентрации ДНКазы I практически не меняется, поскольку соответствующий участок недоступен действию фермента.
Таким образом, рассмотренные выше подходы надежно свидетельствуют о существовании в хроматине гиперчувствительных областей ДНК. Они позволяют также выявить корреляцию между транскрипцией и возникновением гиперчувствительных участков вблизи точки инициации транскрипции. В то же время следует помнить, что обнаружение корреляции еще не означает установления точной причинно-следственной связи событий. Лишь в некоторых случаях с помощью генетического анализа удалось показать, что последовательности гиперчувствительных участков ДНК действительно необходимы для инициации транскрипции. Наиболее интересен пример транскрипции гена Sgs4 Drosophila, о котором упоминалось в гл. 9. В 5'-фланкирующей и структурной областях этого гена было выявлено пять гиперчувствительных участков (рис. 16.12). Эти участки обнаруживаются только в ДНК, выделенной из ядер клеток слюнной железы в стадии развития, сопровождающейся активной экспрессией гена Sgs4. Известны мутанты, которым не свойственна экспрессия этого гена. Соответствующие мутации картируются в 5'-фланкирующей области гена. У двух типов мутантов делегированы наиболее удаленные гиперчувствительные участки ДНК (рис. 16.12). В случае наиболее отдаленной делеции (Ber) налицо практически полное отсутствие транскрипции гена Sgs 4. В хроматине клеток слюнной железы у мутантов Ber обычными методами в районе гена
Рис. 16.12. Участки, гиперчувстви- гурной скобкой отмечен весьма протельные к ДНКазе I в области тяженный гиперчувствительный уча5'-конца гена Sgs 4 и в предшествую- сток в области -330. Внизу отмечены щей области ДНК из ядер клеток две делеции, упомянутые в тексте, слюнной железы Drosophila. Размеры (По Shermoen A.W., Beckendorf S. К., серых кружков отражают относи- 1982. Cell, 29, 601. Copyright 1982 M. тельную чувствительность соответ- I.T.) ствующих участков к ДНКазе I. Фи-
