профилем электрофоретического разделения фрагментов рестрикции как Ηρα ΙΙ, так и Msp I. В то же время в случае метилирования одной или более последовательностей CCGG обнаруживаются различия в наборах рестрикционных фрагментов, полученных при обработке ДНК этими рестриктазами (рис. 16.14). Более того, если метилирование некоторого сайта в ДНК не является полным (то есть часть молекул ДНК в популяции метилирована, а часть - неметилирована по данному сайту), то электрофоретический анализ препарата, полученного при обработк ДНК рестриктазой Ηρα ΙΙ, выявляет картину, которая представляет собой сочетание электрофоретических профилей, показанных на рис. 16.4. Таким образом, при сравнении результатов электрофореза препаратов, полученных при расщеплении ДНК рестриктазами Ηρα ΙΙи Msp I, можно
выявить степень метилирования сайтов CCGG в данном препарате ДНК. Распределение сайтов метилирования в определенных генах можно изучить с помощью переноса и гибридизации по Саузерну электрофоретически разделенных фрагментов рестрикции с использованием в качестве радиоактивных зондов искомых клонированных генов (рис. 16.14). Метилирование тех или иных остатков может быть также выявлено при анализе нуклеотидной последовательности по методу Максама - Гилберта. Метильная группа в m5С блокирует специфическое расщепление по этому остатку, поэтому отсутствие соответствующего фрагмента в наборе, образующемся при статистическом расщеплении по С, указывает точную локализацию модифицированного основания.
Определенные сайты метилирования в ДНК соматических клеток оказываются метилированными также и в ДНК дочерних клеток. При полуконсервативной репликации последовательности Cm5CGG, в которой метилированы обе цепи, дочерние ДНК первоначально получают только по одной метилированной цепи. В эукариотических клетках присутствует так называемая поддерживающая метилаза, которая вскоре узнает возникшие при репликации «полуметилированные» сайты и метилирует остаток С в соответствующем сайте новосинтезированной цепи ДНК (рис. 16.15).
В то же время уровень метилирования ДНК в клетках данного типа подвержен изменениям. Изменения в уровне экспрессии генов данной клетки часто сопровождаются процессами метилирования и деметилирования (рис. 16.15) определенных сайтов, расположенных в области ло-
Рис. 16.15. Три возможных состояния метилирования CG-сайтов в двухспиральной ДНК. Полуконсервативная репликация полностью метилированного сайта приводит к образованию полуметилированного сайта, т.е. метилированного только по остатку С родительской цепи. Поддерживающая метилаза узнает такой сайт и метилирует со-
ответствующий остаток новообразованной цепи, наследственно закрепляя таким образом полностью метилированное состояние данного сайта. Поскольку этот фермент узнает только полуметилированные сайты, положение неметилированных сайтов также закрепляется наследственно.
