АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Иммуногистохимия

Принцип проведения иммуногистохимической реакции основан на специфическом взаимодействии меченых антител (АТ) с тканевыми антигенами (Аг). АТ метят различными способами: флюорохромами (флюоресцеин, родамин и др.), ферментами (пероксидаза хрена), биотином, радиоизотопами или электроноплотными частицами (ферритин, коллоидное золото). Применяют два варианта иммуногистохимических реакций: прямой (рис. 1-4А) и непрямой (рис. 1-4Б). В качестве примеров смотрите также микрофотографии, на которых представлены результаты избирательного выявления ядрышек в клетках культуры (рис. 1-4В), гонадотрофина в плаценте (рис. 1-4Д) париетальных клеток в слизистой оболочке желудка (рис. 1-4Е), инсулина и глюкагона в островках Лангерханса поджелудочной железы (рис. 1-4Ж), Аг базальной мембраны капиллярных клубочков почки (рис. 1-4И, нефрина — компонента фильтрационного барьера почечных телец (рис. 1-4К). При использовании двойной метки (разные АТ, конъюгированные с различными флюорохромами) можно наблюдать на одном срезе взаимное расположение разных структур; так, на рисунке 1-4Г показаны и митохондрии, и микротрубочки.

Рис. 1-4. Иммуноцитохимическая реакция. А. Прямой метод предполагает использование меченых АТ против интересующего Аг. АТ взаимодействуют с Аг в местах их локализации. Эти места выявляют при помощи метки, связанной с АТ. Б. Непрямой метод предполагает использование двух различных АТ. Первые АТ реагируют с Аг ткани. Связанные с меткой вторые АТ специфически взаимодействуют с первыми АТ, которые для вторых АТ являются Аг. Метод значительно чувствительнее прямого, т.к. с каждой молекулой первых АТ связывается несколько молекул вторых АТ, содержащих метку (например, пероксидазу). [17]

Рис. 1-4В. Ядрышки флюоресцируют зелёным цветом. Клетки Hep2 in vitro, антиядерные АТ к т.н. ядерным Аг характерным образом окрашивают разные структуры в составе ядра при системной красной волчанке, ряде системных коллагеновых заболеваний.

Рис. 1-4Г. Фибробласт. Иммунофлюоресцентным методом выявлены митохондрии (зелёное свечение) и микротрубочки (красное свечение). Митохондрии окрашены при помощи первых АТ к СЕ F1 АТФазы и связанных с родамином вторых АТ. Микротрубочки выявлены при помощи АТ против тубулина.

Рис. 1-4Д. Плацента. Непрямым иммуногистохимическим методом при помощи АТ к хорионическому гонадотропину (ХГТ) выявлен источник ХГТ в плаценте: осадок коричневого цвета соответствует локализации синцитиотрофобласта.

Рис. 1-4Е. Париетальные клетки в слизистой оболочке фундального отдела желудка. Иммунофлюоресцентным методом окрашены париетальные клетки (зелёное свечение) фундальных желёз желудка.

Рис. 1-4Ж. Островок Лангерханса поджелудочной железы. Иммунопероксидазное выявление различных клеточных типов при помощи АТ против гормонов. Слева: осадок реакции коричневого цвета соответствует локализации альфа-клеток. Справа: окрашены бета-клетки.

Рис. 1-4И. Капиллярный клубочек. Иммунофлюоресцентный метод позволил окрасить в эелёный цвет один из компонентов базальной мембраны капиллярного клубочка.

Рис. 1-4К. Почечное тельце. Иммунофлюоресцентным методом при помощи АТ против нефрина выявлены подоциты (яркое зелёное свечение).

Дата добавления: 2015-05-19 | Просмотры: 1183 | Нарушение авторских прав