АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ДИАГНОСТИКА. Диагностика ящура основана на эпизоотологических данных, клинических признаках болезни, патологических изменениях и лабораторных исследованиях

Диагностика ящура основана на эпизоотологических данных, клинических признаках болезни, патологических изменениях и лабораторных исследованиях. Подозрение на ящур вызывает любое заболевание восприимчивых животных, характеризующееся появлением везикулярной сыпи в ротовой полости, на конечностях и вымени, повышенной саливацией, чмоканьем, затрудненным приемом и пережевыванием корма, а при осмотре ротовой полос­ти - обнаружением афт и эрозий. Кроме того, обращают внимание на продолжительную хромоту, афты на венчике и в области межкопытной щели, иногда спадение рогового баш­мака, афты на сосках и болезненность последних при доении и сосании с сильно выражен­ным защитным рефлексом.

Эпизоотологический диагноз - высокая контагиозность, избирательное поражение толь­ко парнокопытных. Методы лабораторной диагностики ящура варьируют в зависимости от того, необходимы ли раннее обнаружение и типовая (вариантная) идентификация вируса (ранняя диагностика) или обнаружение и идентификация специфических противоящурных AT у животных-реконвалесцентов (ретроспективная диагностика).

Выделение вируса. Эффективность выделения вируса из патологического материала повышается при использовании методов очистки и концентрирования вируссодержащих суспензий Благодаря удобству выполнения, экономичности, а главное, возможности быст­рого получения результатов, позволяющих одновременно определить типовую и вариантную принадлежность эпизоотического вируса, чаще всего применяют РСК или РДСК. Однако, когда доставленное количество вирусного материала недостаточно для исследования или РСК дает отрицательный результат или неспецифическую задержку гемолиза, то ставят биопробу на КРС (не менее 2 голов) в возрасте 18 мес, вводя 0,1 мл суспензии полученного материала в несколько точек слизистой оболочки языка и мякишей конечностей; общий объем испытуемого материала 2-3 мл. Появление афт на месте введения материала с после­дующим подтверждением в РСК свидетельствует о наличии ВЯ. Однако метод дорог и свя­зан с опасностью выноса вируса за пределы учреждения. Поэтому в диагностической прак­тике он применяется очень редко. Чаще для биопробы используют мышат-сосунков 4-6-дн возраста, морских свинок массой не менее 500 г и первичную культуру клеток почек телят, поросят, ягнят, щитовидной железы КРС и перевиваемые клетки - ВНК-21, IB-RS-2. Био­проба на мышах удобна и экономична. ИД5о испытуемого штамма на мышатах-сосунах и крупном рогатом скоте одинаковы. Мышата-сосуны более чувствительны к вирусу ящура, чем морские свинки. Однако необходимо иметь в виду, что оценка результатов титрования на мышатах-сосунках нередко затруднительна.

Морские свинки легко заражаются при интрадермальном введении вируссодержащего материала в плантарную поверхность задних лапок методом тунелирования в дозе 0,2-0,5 мл. Заражают не менее 5 голов. Первичные поражения обычно появляются через 2-5 дн. (по мере созревания). Вторичные поражения - везикулы в ротовой полости - обычно развивают­ся при заражении штаммами, адаптированными к морским свинкам.

Индикация и идентификация вируса. В качестве экспресс-метода в настоящее время широко применяется ПЦР. Это быстрый и чувствительный метод обнаружения ВЯ в тканях путем энзиматической амплификации РНК гена полимеразы.

РСК по 100%-ному гемолизу. Применяется для определения типов и подтипов (вариантов) ВЯ, вызвавших заболевание животных, а также для проверки производствен­ных штаммов ВЯ при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-исследовательской работе (см."Методы лабораторной диагностики вирусных болезней жи­вотных" (М. Атропромиздат,1986.250-258).

Антигенное родство (R) более 70% свидетельствует о том, что штаммы по антигенным свойствам идентичны друг другу и относятся к одному и тому же варианту, от 10 до 70% - к различным вариантам (подтипам) и менее 10%- к различным типам.

РСК по 50%-ному гемолизу. Успешно применяют в работе научно-исследовательских лабораторий и учреждений биологической промышленности. Разработан способ изучения иммунного статуса вакцинированных против ящура животных в РСК. Он позволяет спе­циалистам на уровне областных ветлабораторий проводить мониторинг за иммунным со­стоянием стад в простой и достоверной реакции.

РНГА. Это простой, ускоренный, чувствительный метод идентификации ВЯ. По чувст­вительности реакция превосходит общепринятый метод типирования ВЯ в РСК в 8-16 раз. Сущность ее заключается в том, что нагруженные AT эритроциты агглютинируются при контакте с ящурным АГ гомологичного типа.

Типирование ВЯ. Определение типа ВЯ методом перекрестного иммунитета. Испытание перекрестно­го иммунитета на КРС с целью определения типовой принадлежности полевого штамма ВЯ проводится лишь в том случае, если по лабораторным тестам обнаруживается новый тип ВЯ, ранее не встречавшийся в стране Определение типа ВЯ методом перекрестного имму­нитета возможно и на морских свинках.

Штаммы считают идентичными, если вакцина предохраняет животных от развития генерализованного процесса при заражении используемыми штаммами. В случае иммунологического отличия штаммов вакцинированные животные, инфицированные гетерологичным штаммом, заболевают генерализованной формой ящура.При определении в культуре леток типа ВЯ его относят к тому типу, сыворотка против которого предотвращает ЦПД. Разработан вариант универсальный эритроиммуноадсорбции (УЭИА), позволяющий определять АГ ВЯ в более высоких титрах, чем в РСК и РПГА.

ИФА. Высокоэффективен для выявления как 146S-, так и 12Б-компонентов ВЯ. Этот метод в 500 раз чувствительнее РСК при исследовании проб афтозного эпителия. Установ­лена высокая степень специфичности и чувствительности ELISA для идентификации и тапироврния ВЯ всех 7 серотипов в эпителиальных тканях. Установлена высокая чувстви­тельность сэндвич-варианта ИФА (на основе щелочной фосфатазы), который по эффектив­ности превосходит в 207-219 раз, а с хромогенными субстратами - в 4-64 раза. ИФА может быть пригодной в системе лабораторной диагностики ящура при исследо­вании диагностических штаммов. Для выявления AT к ВЯ в ИФА можно использовать про­бы крови, высушенной на фильтровальной бумаге Первоначальный объем гепаринизированной крови равен 7,65 мкл.

Ретроспективная диагностика с целью определения типа и варианта ВЯ, вызвавшего в прошлом заболевание животных, основана на идентификации AT в РПСК, РДП и РРИД, НРИФ, реакции серозащиты на мышатах и РН в культуре клеток.

Для достоверного выявления AT и определения их типовой специфичности пробы сыво­ротки крови должны быть взяты не ранее 7 дн с момента появления у животных признаков везикулярного заболевания или проведения вакцинации. На исследование следует направлять 5-10 проб сыворотки от каждой возрастной группы На партию проб сыворотки, на правляемой для исследования, оформляют сопроводительный документ.

Выявление, идентификация типовой специфичности и количественное определение AT ВЯ в РРИД, РПСК, РНСК и НИФ могут проводиться в условиях обычных ветеринарных диагностических лабораторий и не требует создания более строгого санитарного режима, поскольку проводятся с неинфекционньми материалами.

Для обнаружения ингибиторных (неполных) AT применяют РНСК (или РПСК). Эти АТ отличаются высокой авидностью. Они формируют комплекс АГ-АТ, не адсорбирующий комплемент. Связываясь с АГ быстрее полных AT, они блокируют его, но не связанный при этом комплемент в присутствии гемолитической сыворотки вызывает лизис эритроцитов. Ингибиторные AT обнаружены сейчас при многих инфекциях, в том числе при ящуре. Данная реакция применяется для определения типов ВЯ по сывороткам переболевших живот ных, а также для обнаружения постинфекционных и поствакцинальных AT.

Типирование ВЯ по сывороткам переболевших животных в РДП. В реакции используют АГ из очищенного и концентрированного лапинизированного ВЯ типов О, А, С и др., сыворотки от переболевших ящуром животных (не пригодны для исследования в РДГ сыворотки крови животных, дважды переболевших ВЯ различных типов), типоспецифические сыворотки, агаровая среда

Постановка реакции в центральные лунки 7-ми 6-угольных систем на агаровых пластинках помещают соответствующие АГ типов О, А, С и др. В периферические лунки помещают пробы испытуемых и контрольных сывороток. Затем пластинки выдерживают во влажной камере при 37°С. Реакцию учитывают через 16, 24, 48 и 72 ч после постановки. Положительная реакция характеризуется образованием одной или двух четких линий преципитации между лункой с АГ и сывороткой. ВЯ относят к тому типу, с АГ которого испытуемая сыворотка дает положительную реакцию В случае обнаружения в сыворотках преципитирующих AT к 2 и более типам вирус относят к тому типу, с АГ которого испытуемые сыворотки дают наибольший процент положительных реакций.

РИД. Сущность ее заключается в формировании зоны специфической преципитации вирусных антигенов антителами, включенными в состав агарового геля. Реакция является типоспецифичной, позволяет провести исследования по типированию и количественном; определению постинфекционных и поствакцинальных AT

Встречный ИЭФ. Может быть с успехом использован для серотипирования ВЯ Чувст­вительность его такая же, как и РДП, но учет результатов производится через 1,5 ч, тогда как реакция иммунодиффузии требует не менее 24 ч.

НИФ. При ящуре позволяет проводить дифференциацию AT переболевших животных от вакцинированных. Выявление в НИФ специфического свечения свидетельствует о наличии в испытуемой сыворотке постинфекци­онных антител, т.е. о переболевании животного ящуром. С помощью РНГА определяют напряженность поствакцинального иммунитета у КРС. Установлена корреляция результатов, полученных при РПГА и РН. С помощью монАТ в РН или ELISA определяют не нейтрализуемые варианты ВЯ. В зависимости от чувствительно­сти к монАТ все варианты ВЯ разделены на 3 группы Варианты 1-й группы имели мутации преимущественно в области 140-160 VP1, варианты 2-й и 3-й групп мутируют в области 204 VP1 и 70, 139, 195 VP3 соответственно. Определены две большие АГ зоны вируса: чувстви­тельная и нечувствительная к трипсину (VP1 140-160 и VP3 соответственно).

Реакция серозащиты на мышатах-сосунах. Используется для определение типа ВЯ по сывороткам животных-реконвалесцентов Для постановки реакции используют эталонные (адаптированные к организму 4-7-дн мышат-сосунов) штаммы ВЯ различных типов. Штам­мы должны быть типоспецифическими и иметь титр на мышатах-сосунах не ниже 7 lg в 1 г. ВЯ, вызвавший заболевание животных, относят к тому типу, при заражении которым привитые сывороткой мышата остались живы. Необходимым условием достоверной оценки реакции серозащиты является обязательная гибель контрольных мышат, которым введен вирус, в то время как контрольные мышата, которым вводили только испытуемую сыворот­ку, должны выжить.

РН в культуре клеток. Для постановки РН необходимо иметь 24 пробирки культур клеток Отсутствие ЦПД в пробирках, в которые внесена смесь вируса с сывороткой, при четко выраженном ЦПД в контрольных пробирках, указывает на наличие в исследуемой сыворотке AT против данного типа ВЯ. Специфичность ЦПД можно установить путем ис­следования в РСК культуральной жидкости, полученной из пробирок с выраженным ЦПД.

Дифференциальная диагностика. При дифференциальной диагностике ящура необхо­димо исключить ВС, ВЕС, ВЭС, катаральную лихорадку овец. Для дифференциальной ди­агностики в лабораториях используют диагностические наборы, выпускаемые биологиче­ской промышленностью, для ящура и ВБС.

Иногда в материале от людей, подозреваемых в заболевании ящуром, выделяли возбу­дителя энтеровирусной инфекции человека - вирус Коксаки серотипа В. Вирус вызывал ви­димое ЦПД в перевиваемых культурах клеток в течение 24 ч, имея икосаэдрическую форму, размером 20-30 нм и вызывал гибель мышат при интрацеребральном заражении.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 791 | Нарушение авторских прав