АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ. Морфология и химический состав

Морфология и химический состав. Установлен генетический плеоморфизм гена нуклеопротеида Б. Все 69 изолятов ВБ из различных частей мира принадлежат к серотипу 1, причем идентифицировано по крайнем мере 12 филогенетических линий в соответствии с географической локализацией хозяина. Селекция, возможно, связана со специфичностью хозяина, ограничивает изменения аминокислотных последовательностей и АГ дрейф.

Устойчивость. Низкие температуры консервируют вирус. Температура 23°С инактивирует его через 28-53 дня, 50°С - через 1 ч, 60°С - за 5-10 мин, 70°С - мгновенно. Высушивание инактивирует вирус в течение 10-14 дн. В гниющем материале он гибнет через 15 дн. УФ лучи убивают за 5-10 мин. Дезинфицирующие в-ва (р-ры формальде­гида, гидроксида натрия, хлорной извести) действуют на ВБ губительно. Вирус устойчив к рН 5-10 при 4°С.

Антигенная структура. Нуклеокапсид ВБ представляет собой спиральные тела, со­стоящие из белков N, NS и L, составляющих 96% его массы, белок N-вирионной РНК, за­щищающей ее от действия РНК-азы; высокомолекулярный белок L и небольшой белок NS не связаны с нуклеокапсидом и содержатся в вирионе в незначительном количестве. Внут­ренним белком вирусной оболочки является негликозилированный мембранный или матриксный (М) белок. Кроме белка М у ВБ в состав внутреннего слоя оболочки входит белок А или клеточный актин с мол.м. 43 кД, содержание которого достигает 1-5% массы вирионных белков. До недавнего времени считалось, что все штаммы ВБ имеют одинаковый АГ состав. Однако с помощью монАТ удается легко различать фиксированные и дикие его штаммы как по нуклеокапсидн.ым, так и по гликопротеиновым АГ. В вирионах ВБ обнару­жено 5 белков. Гликопротеин G способен индуцировать образование ВНА и защищать животных от заражения. Нуклеокапсидный АГ индуцирует образование КСА и ПА.

Антигенная вариабельность и родство. Ранее все штаммы ВБ рассматривались как единые в АГ отношении. Однако благодаря гибридомной технологии появилась возмож­ность получения монАТ к отдельной АГ детерминанте. МонАТ позволили выявить тонкие АГ связи и различия между штаммами вирусов группы Б. В настоящее время считают, что вирус Б имеет 4 серотипа, что, видимо, обусловлено различием в составе мембранных бел­ков. Учитывая это, была предложена следующая классификация вируса: вирус 1-го сероти­па; прототип этого вируса - шт. CVS и сходные с ним полевые и лабораторные штаммы, выделенные в различных частях света; вирус 2-го серотипа; прототип его - шт. Lagos Bat, выделенный из костного мозга летучей мыши в Нигерии; вирус 3-го серотипа; прототип его - шт. Мокола, выделенный от землеройки и человека; вирус 4-го серотипа - шт. Obodhiang, выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован. Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны. Нуклеопротеидные АГ различных ВБ имеют группоспецифическое родство с другими рабдовирусами. Мо­нАТ к различным штаммам ВБ открыли новую страницу в изучении тонкой АГ структуры лиссавирусов, представили дополнительные возможности для решения теоретических и прикладных задач рабиологии. Показана перекрестная защита мышей против широкого спектра изолятов ВБ. Любой штамм ВБ или его гликопротеин могут быть использованы для вакцинации во всем мире.

Локализация и выделение вируса. Многочисленные исследования патогенеза Б позволили условно разделить острую рабическую инфекцию на III основных фазы: I - экстраневральная фаза, без видимого размножения вируса в месте инокуляции, II - интраневральное, центростремительное распространение инфекции и III - диссеминация вируса по всему организму, сопровождаемая появлением симптомов болезни и, как правило, гибелью животного. Распространение ВБ по нервным путям впервые доказано Пастером и Ру. Вирус проникает в организм со слюной в местах укуса и непродолжительное время сохраня­ется в месте внедрения (до 2-х нед.), а затем по центростремительным нервам продвигается к спинному и головному мозгу. Из мозга по центробежным нервам он попада­ет в слюнные железы, где репродуцируется в нервных узлах и после дегенерации нервных клеток выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Из мозга вирус также нейрогенным пу­тем попадает в слюну, роговицу, надпочечники. Выделение вируса по слюной начинается за 10 дн. до проявления клинических признаков, поэтому французский регламент предусматри­вает 15-дн. срок наблюдения за покусавшим животным. У бешенной лисицы накапливается в слюнных железах столько вируса, что можно заразить 67 млн. лисиц. Доказано нахожде­ние вируса во всех внутренних органах и крови, кроме сальника, селезенки и желчного пу­зыря. Из ЦНС по нервным путям вирус попадает во внутренние органы, а затем в кровь. Та­ким образом происходит стадия генерализации инфекционного процесса.

Персистенция вируса. За последние годы описаны казуистические случаи неоднократ­ного выделения ВБ из слюны здоровых собак на протяжении почти 2-х лет после их инфицирования. Аналогичная картина наблюдалась и у некоторых экспериментально заражен­ных кошек. В 1981 г представлены результаты 4-летного изучения Б мангустов, выловлен­ных в ряде районов Гренады. С помощью ИФ ВБ обнаружен в срезах мозга 100 (2,1%) из 4754 обследованных мангустов. Среди 1675 обследованных животных обнаружены ВНА в пробах 498 сывороток (30%). При сопоставлении результатов обнаружения Б и соответст­вующих AT обнаружено, что число больных животных в течение 1971-1974 гг. ежегодно снижалось (с 3,5 до 0,6%), количество мангустов с определяемыми AT увеличилось с 20,8 до 43,2%. AT к Б, как отмечено, в опытах с отловленными в природе мангустами (20 осо­бей), циркулировали в крови еще 35 мес. У животных с наиболее высокими титрами AT (1: 1400) отмечена и наибольшая скорость их снижения.

Одно из свойств ВБ - способность к персистенции in vivo и in vitro Хроническая инфек­ция клеток Нер-2/2 и ВНК-21/13 фиксированным ВБ сопровождается определенными изме­нениями клеточного метаболизма. АГ ВБ образуется в цитоплазме клеток независимо от включений. Персистенцию ВБ удается наблюдать при хронической инфекции в клеточных культурах, причем по морфологии и скорости размножения клеток хронически инфициро­ванные культуры не отличались от незараженных. Вирусный АГ передавался при делении клеток. После того, как была показана возможность образования дефектных интерфери­рующих частиц (ДИЧ) ВБ при первичной инфекции in vivo, ДИЧ были выделены и охарак­теризованы при хронической инфекции ВБ клеток ВНК. Генерация ДИЧ в нейронах ЦНС может не только определять окончательный исход инфекции, но и объяснять ее латентный характер. В настоящее время данные о роли интерферона и ДИЧ в механизме хронической инфекции ВБ в клеточных культурах противоречивы.

Антигенная активность. Животные, иммунизированные против Б, продуцируют ВНА, КСА, ПА, анти-ГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) AT. Поверхностный гликопротеин G оболочки ВБ - единственный белок, от­вечающий за индукцию ВНА и формирование протективного иммунитета, защищая лабора­торных животных от латентной инфекции. В отличие от цельных вирионов субвирус­ный препарат не обладает ГА активностью. Нуклеокапсидн.ый АГ вызывает образова­ние КСА и ПА. Он является группоспецифическим АГ для всех лиссавирусов. Препараты очищенного нуклеокапсида из клеток ВНК-21, зараженных шт. FLURI-HEP и ERA, индуци­руют только КСА. Иммунные AT сыворотки крови в присутствии комплемента лизируют зараженные культуры клеток. Между титрами КСА и ВНА никакой корреляции не обнару­жено. Эти AT появляются независимо друг от друга и индуцируются, по-видимому, разны­ми АГ. Накопление КСА характеризует ответ на вакцинацию, но этому не обязательно со­путствует накопление ВНА.

Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на теплокровных всех видов, однако в условиях лаборатории - чаще всего на мышах и сравнительно редко (требуются особые условия) на собаках. Показана различная чувствительность мышей к эксперимен­тальному Б в зависимости от патогенных свойств вируса, пола, возраста и способа инфицирования. Показано, что патогенность v.fixe Б для взрослых мышей зависит от АГ детерми­нант поверхностных гликопротеинов вируса. Изменение патогенности коррелирует с заме­щением аргинина в позиции 333 молекулы гликопротеина другой аминокислотой. Последнее время появились сообщения о возможности выздоровления больных Б животных в есте­ственных и экспериментальных условиях.

Культивирование. Помимо интрацеребральных пассажей на кроликах и белых мышах ВБ (шт. Fluri-HEP и Lep) успешно репродуцируется в культуре фибробластов КЭ. Показана высокая чувствительность к ВБ (шт ТС-80 и CVS) и высокий уровень накопления АГ в зараженных перевиваемых культурах - почки сайгака (ПС) и почки эм­бриона африканской козы (ПЭАК). Показана также возможность культиви­рования ВБ в культурах клеток слюнной железы и почки собаки, жировой ткани летучей мыши, почек поросенка, кролика, сирийского хомяка, эмбрионов овцы, человека и японских перепелок. ВБ адаптирован и к перевиваемым линиям клеток (ВНК-21/13, эндотелия кроли­ка, диплоидной линии клеток легких эмбриона человека - HDC S, известной под названием Wi-38) Показана возможность его репродукции в перевиваемых линиях клеток пойкилотермных позвоночных, в частности, в клетках рыбы, змеи, черепахи и ящерицы Наиболее перспективна перевиваемая линия клеток ВНК-21/13, использование которой позволяет накапливать вирус в больших количествах. Не все штаммы с одинаковой легкостью поддают­ся адаптации к культуре клеток. При адаптации ВБ к культурам клеток прибегают к различ­ным приемам. Интенсивность размножения вируса в культуре клеток можно постоянно кон­тролировать методом ИФ. К ВБ после предварительной адаптации восприимчивы и КЭ. Для культивирования штаммов уличного ВБ обычно используют КЭ.

ГА свойства. Обусловлены наличием у вируса ГА АГ, находящегося на поверхности вириона в выступах его оболочки. Было показано, что выращенный в культуре клеток и концентрированный ВБ вызывает феномен гемагглютинации. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость, поэтому титрование вируса по инфекционности может быть заменено тестом определения ГА активности.

ГАд свойства. Впервые гемадсорбирующие свойства ВБ (шт. Мочалин), выращенного в культуре первичных клеток почки сирийского хомячка, описаны в 1967 г. Феномен вос­производился с эритроцитами гуся, курицы, сирийского хомячка, морской свинки и обезья­ны при температуре 4°С. Специфичность реакции была подтверждена с помощью иммунной сыворотки; после 3-4-кратного отмывания гемадсорбция не разрушалась и не воспроизво­дилась с другими штаммами ВБ.

Дата добавления: 2014-12-11 | Просмотры: 758 | Нарушение авторских прав