АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Одержання вітаміну В12 за допомогою пропіоновокислих бактерій.

У 70-х роках 20 ст. цікавість вчених привернули пропріоновокислі бактерії, відомі ще з 1906 року, які широко застосовували при виготовленні препаратів для тваринництва. Виділено 14 видів пропіоновокислих бактерій, які продукують вітамін В12. Для одержання високоочищених препаратів вітаміну В12, пропіоновокислі бактерії культивують періодичним способом на матеріалах, які містять глюкозу, казеїновий гідролізат, вітаміни, неорганічні солі, хлорид кобальту. Додавання в середовище попередника 5,6 – диметилбензимідазола стимулює швидкий синтез вітаміну. Мутант пропіоновокислих бактерій продукує до 30 мг/л вітаміна

Для одержання високого виходу вітаміну, використовують двохстадійний процес. На першій стадії, культуру вирощують в анаеробних умовах, до повної утилізації цукру. На другій стадії включають аерацію, тим самим створюючи умови для синтезу 5,6 ДМБ і перетворення етиокобаламіну в дезоксикобаламін. Обидві стадії проходять або в одному, або в двох різних ферментерах. Анаеробно вирощені клітини можна відділяти центрифугуванням та інкубувати. Додають ДМБ лише в другій стадії ферментації, так, як в його присутності утворюються повні форми вітаміну, які інгібують його синтез.

Середовище ферментації зазвичай містить глюкозу, або інвертовану мелясу (10 – 100 г/л), невелику кількість солей Fe, Mn та Mg, а також Со (10 – 100 мг/л). в середовище додають кукурузний екстракт (30 – 70 г/л), який включає в себе молочну та пантотенову кислоти, які підсилюють ріст бактерій. Пантотенову кислоту, яка стимулює також синтез вітаміну, рекомендують вносити в середовище додатково. Бактерії культивують при температурі 30°, підтримуючи рН на рівні 6,5 - 7,0 шляхом введення (NH4)ОН. Ферментація проходить в ферментерах 500 л, які міститимуть 340 л середовища, 7 л посівного матеріалу. У перші 80 годин культура росте під невеликим тиском N2 і при слабкому перемішуванні (без аерації). У наступні 88 годин, вмикають аерацію(2 м³/год) та переміщування. Можливі деякі варіації в культивуванні.

Вітамін В12 зберігається в клітинах бактерій, через це проводять його екстракцію: 1) виділяють вітамін із клітин і перетворюють його в ціанокобаламін, 2) виділення неочищеного продукту (80% чистоти), який можна використовувати в тваринництві, 3) подальша очистка до рівня 91-98% (для медичних цілей).

Для екстракції вітаміну із клітин, останніх нагрівають при 80° - 120°С протягом 10 – 30 хвилин при рН 6,1 – 8,5. Перетворення в СN-кобаламін досягають, обробляючи гарячий розчин або клітинну суспензію ціанідом, або тіоціонатом, часто в присутності NaNО2 або хлораміну В. Корриноїди сорбують на різних носіях: амберліті, активованому вугіллі, та елюірують водними спиртами або водно – фенольними сумішами. Із водних розчинів корриноїди екстрагують фенолом або крезолом або сумішшю цих спиртів з бензином, бутанолом, хлороформом.

При упарюванні різних розчинників отримують осад або кристали вітаміну В12, які розчиняють у відповідному розчиннику до потрібної концентрації. Вихід вітаміну В12 при використанні пропіоновокислих бактерій – 25 – 40 мг/л.

У процесі одержання вітаміну В12, за допомогою пропіоновокислих бактерій, застосовують дорогу антикорозійну апаратуру, важкі і дорогі поживні середовища.

Удосконалення технологічного процесу іде в напрямі здешевлення компонентів поживного середовища (заміна глюкози сульфідними лугами)та переходу з періодичного культивування на безперервний процес.

Дата добавления: 2015-11-25 | Просмотры: 453 | Нарушение авторских прав