Практическая часть. 3.1.Приготовление рабочих растворов.
3.1. Приготовление рабочих растворов.
Опыт 1. Приготовление калибратора.
Выполнение опыта:
Внести во флакон с калибратором 2,0 мл дистиллированной воды. После полного растворения концентрация билирубина – 85,5 мкмоль/л. Данный раствор стабилен в течение 5 дней при температуре 2-8°C. Реагент хранить в темноте!
Опыт 2. Приготовление диазореагента.
Выполнение опыта:
Смешать растворы сульфаниловой кислоты и нитрита натрия в соотношении 10:1. Диазореагент стабилен не менее 10 дней при температуре хранения 2-8°C в плотно закрытом флаконе в темноте.
3.2. Лабораторная работа: «Определение количества билирубина в сыворотке крови по методу Йендрашина».
ПРИНЦИП: В результате реакции между билирубином и диазотированной сульфаниловой кислотой образуется окрашенный комплекс (розово-фиолетовый), имеющий максимум поглощения при длине волны 540 нм. Для определения общего билирубина необходима диссоциация неконъюгированного (непрямого, свободного) билирубина, что достигается введением в реакционную смесь кофеина. При определении содержания конъюгированного (прямого, связанного) билирубина кофеин из реакционной смеси исключается.
Концентрация неконъюгированного билирубина рассчитывается по разнице концентрации между общим и конъюгированным билирубином.
Оборудование: штатив с пробирками, штатив с пипетками, пипетки градуированные (1мл и 2 мл), микропипетки (0,2 мл); спектрофотометр.
Реактивы: набор реагентов «Абрис+» для определения концентрации билирубина в сыворотке крови; дезинфицирующий раствор – 0,5% раствор Полидеза; физиологический раствор.
Материал для исследования: сыворотка крови.
Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 423 | Нарушение авторских прав
|