АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение протеолитической активности микробов

Прочитайте:
  1. IV. Определение симметрии АД
  2. А Дайте определение понятию «гипноз»
  3. Адгезия микробов к пломбировочным, реконструктивным и ортопедическим материалам
  4. Анемии. Определение. Классификация. Железодефицитная анемия. Этиология. Клиническая картина. Диагностика. Лечение. Профилактика. Особенности приема препаратов железа у детей.
  5. Антисептика, определение, виды современной антисептики (механическая, физическая, химическая, биологическая).
  6. Асептика – комплекс мероприятий, направленных на предупреждение попадания микробов в рану. Антисептика – комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов в ране.
  7. Асфиксия новорожденного. Определение. Этиология. Классификация. Клиническая картина. Первичная и реанимационная помощь.
  8. Атопический дерматит. Определение. Этиология. Классификация. Клиническая картина. Диагностика. Лечение. Уход. Диетотерапия. Организация быта больного ребенка.
  9. Бред, определение.
  10. Бронхиолиты. Определение, этиология, патогенез, диагностика, клиника, лечение.

а) На желатине. Мясопептонный желатин разливают в

пробирки столбиком по 5— 6 мл. Посев производят

уколом, погружая петлю с исследуемой культурой в

глубь питательной среды до дна пробирки. Микробы,

способные расти при низкой температуре, оставляют

стоять в комнате при 20—22°С. Остальные посевы ин-кубируют в термостате при 37 °С. Вместе с опытными

пробирками в термостат ставят одну или две пробирки с

незасеянным желатином для контроля. При температуре

37 °С желатин плавится, поэтому после инкубации

пробирки, вынутые из термостата, опускают в холодную

воду или ставят в холодильник. После застудневания

желатина в контрольных пробирках приступают к

просмотру роста и учету изменений в питательной среде

опытных пробирок. Там, где под действием фермента

желатиназы произошло расщепление белков желатина,

отмечается разжижение питательной среды. Пробирки,

в которых после суточного инкубирования среда

остается без изменения, оставляют в термостате, наблю-дение за изменением среды ведется в течение 20 сут. В

протоколе исследования обязательно отмечают день

появления признаков разжижения среды, степень и

характер ее разжижения.

б) На молочном агаре Эйкмана. Молочный агар

Эйкмана, разлитый и остуженный в чашках Петри,

засевают исследуемой культурой микробов. Посев

делают петлей или шпателем так, чтобы получить

изолированные колонии. Через 24—48 ч инкубации в

термостате культуры, продуцирующие

протеолитический фермент, обусловливают

пептонизацию молочного белка — казеина, в результате

чего вокруг таких колоний образуются прозрачные

зоны, четко выделяющиеся на общем молочно-мутном

фоне среды.

в) На свернутой кровяной сыворотке. Культуру

исследуемых аэробных микробов засевают на чашки,

анаэробных — уколом в столбик свернутой лошадиной

сыворотки, инкубируют в термостате при 37 °С. Штам-мы, продуцирующие протеолитические ферменты,

разжижая питательную среду, образуют углубления

вокруг колоний или на поверхности столбика среды.

г) В бульоне с куриным яичным белком. В пробирку с

мясопептонным бульоном или бульоном Хоттингера,

содержащим кусочек свернутого куриного белка, вносят

одну петлю исследуемой культуры микроба. Посевы

просматривают ежедневно в течение 5 дней.

Протеолитически активные культуры микробов

расщепляют коагулированный яичный белок; кусочки

белка, содержавшиеся в среде, заметно уменьшаются в

размере, превращаясь в крошкообразную массу, или

полностью растворяются. Аналогичным образом

проявляются протеолитические свойства микробов в

средах с кусочком вареного мяса.

Некоторые виды патогенных микробов с

выраженной протеолитической активностью обладают

способностью расщеплять белок и пептон до продуктов

глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины и аммиака. При определении видов и дифференциации разновидностей патогенных микробов наибольшее значение имеет выявление двух первых продуктов: индола и сероводорода.

Определение индола в культуре микроорганизмов.

Индол образуется при расщеплении сложной

гетероциклической кислоты - триптофана. Для

выявления индолообразования петлю исследуемой

культуры засевают в среду Строгова или другие среды,

рекомендуемые для обнаружения индола. Тотчас после

посева в пробирку вносят полоску индикаторной

бумаги, пропитанную раствором щавелевой кислоты,

так, чтобы индикаторная бумага не касалась

питательной среды. Для этого верхнюю треть бумажной

полоски прижимают пробкой к стенке пробирки.

Посевы инкубируют 24—48 ч при температуре 37°С.

Образование индола определяют по окрашиванию

нижнего конца индикаторной бумаги в бледно-розовый

цвет, хорошо заметный в проходящем свете.

Определение сероводорода. Сероводород является

конечным продуктом расщепления аминокислот:

цистина, цистеина и метионина, содержащих серу.

Петлю исследуемой культуры микробов засевают в

пробирку с мясопептонным бульоном или бульоном

Хоттингера. Тотчас после посева в пробирку вносят

пропитанную ацетатом свинца полоску индикаторной

бумаги на определение сероводорода. В положительных

случаях образующийся в культуре сероводород вступает

в соединение с бесцветным ацетатом свинца и

превращается в сульфат свинца, который придает

индикаторной бумаге черно-бурое окрашивание.

Окончательный учет результатов на образование индола

и сероводорода проводят на 7—10-й день после посева,

так как процесс ферментативного расщепления белка и

образования конечных продуктов распада происходит

иногда в течение длительного времени.

Окислительно-восстановительные свойства

микроорганизмов. В культуре микробов могут быть

обнаружены окислительно-восстановительные

ферменты, связанные главным образом с дыхательной функцией микроорганизма. Как известно, процесс окисления субстрата может происходить посредством присоединения к нему кислорода с участием ферментов оксидаз или в результате отщепления от него водорода с участием ферментов дегидраз. Для этого типа реакции характерно то, что окисление какого-либо одного вещества всегда сопровождается восстановлением (ре-дукцией) другого органического вещества. Первое вещество, от которого отщепляется водород, называют донором, а то вещество, к которому он присоединяется, - акцептором. Акцептором водорода чаще всего является кислород воздуха, однако им могут быть также многие органические соединения, способные легко

окисляться и восстанавливаться. С целью выявления

ферментов дегидраз и определения их активности в

практике микробиологических исследований предложен

метод, основанный на введении в питательную среду

органической краски, выполняющей роль акцептора

водорода. В результате присоединения водорода

краситель восстанавливается, превращаясь в бесцветное

соединение, называемое лейкобазой. При обильном

доступе кислорода оно может вновь окислиться и

приобрести прежний цвет. В качестве акцептора

водорода используют метиленовый синий, лакмусовую

настойку, малахитовый зеленый, индиго-кармин,

нейтральный красный и др. Для выявления

редуцирующих свойств микроорганизмов указанные

красители добавляют к обычным питательным средам:

мясопептонному бульону, мясопептонному агару,

молоку. Один и тот же вид микроба ведет себя

неодинаково по отношению к краскам разного состава.

Это свойство микроба использовано в

микробиологической практике в качестве

дифференциального признака. Бактерии брюшного

тифа редуцируют метиленовый синий, но не

редуцируют лакмуса и не изменяют нейтрального

красного в противоположность кишечной палочке,

которая остается нейтральной в отношении

метиленового синего, но восстанавливает лакмус и

нейтральный красный.

Определение редуцирующей способности.

1. В 5 мл среды - молока с метиленовым синим -

засевают петлю исследуемой культуры с плотной

питательной среды или 0,1 мл 18-часовой бульонной

культуры н после ч инкубации учитывают результаты

роста. При положительной реакции на редукцию

метиленового синего среда из голубой становится

кремового цвета, а при слабоположительной —

приобретает зеленоватое окрашивание.

2..Пробирки с лакмусовым молоком, средой Минкевича

засевают так же, как молоко с метиленовым синим,

суточной культурой с плотной или жидкой питательной

среды. Посевы инкубируют в термостате в течение 10

дней, ежедневно наблюдая за изменением цвета среды.

Редукция лакмуса проявляется полным

обесцвечиванием молока, имеющего розовато-сиреневый цвет до посева. В протоколе исследования

редукцию лакмуса обозначают буквой Р.

Среда Минкевича позволяет также выявлять кислото -

или щелочеобразование, выражающееся соответственно

в покраснении или посинении молочной среды.

Образование кислоты обозначается буквой К, щелочи

— буквой Щ.

Определение фермента каталазы. Некоторые виды

микроорганизмов, принадлежащие к группе аэробов, в

процессе дыхания образуют перекись водорода,

являющуюся клеточным ядом. Количество перекиси

водорода в культуре никогда не достигает высоких

концентраций, так как по мере образования перекись

расщепляется на воду и молекулярный кислород при

участии фермента каталазы. На поверхность микробной

культуры, выращенной на плотной питательной среде в

чашке Петри, наносят 1—2 мл 1% раствора перекиси

водорода так, чтобы она покрывала поверхность

культуры тонким слоем. Появление пузырьков газа в

слое нанесенной жидкости свидетельствует об

образовании кислорода в результате расщепления

перекиси водорода под действием каталазы. Подобный

результат в протоколе опыта отмечается знаком + как

положительный результат реакции на каталазу.


Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 761 | Нарушение авторских прав







При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.01 сек.)