ОСОБЕННОСТИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РИККЕТСИЙ И ХЛАМИДИЙ.
1. Риккетсии и хламидии – бактерии – облигатные внутриклеточные паразиты. В отличие от вирусов размножаются простым делением, содержат оба типа НК (ДНК и РНК) и многие ферменты, необходимые для энергетического и пластического метаболизма. Риккетсии по типу дыхания – аэробные микроорганизмы, активно окисляют глутаминовую кислоту и не расщепляют глюкозу, имеют высокопроницаемую оболочку, что позволяет им получать из клетки-хозяина необходимые ферменты и метаболиты. Хламидии – энергетические паразиты клетки-хозяина, у них отсутствуют энергодающие ферментные системы.
2. Искусственные питательные среды даже самого сложного состава не могут удовлетворить потребности риккетсий и хламидий. Для их размножения необходимы живые метаболизирующие клетки, в отличие от вирусов, эти клетки должны обладать пониженной метаболической активностью.
3. Для выделения и культивирования риккетсий и хламидий применяются: а) тканевые культуры (описаны выше); б) куриные эмбрионы; в) восприимчивые лабораторные животные.
4. Культивирование риккетсий проводят на переживающих тканях в жидкой среде Мейтлендов (раствор Тироде и сыворотка) при 37° С 10-14 дней или на Тироде-сывороточном агаре с добавлением на поверхность измельченной эпителиальной ткани при 37° С 6-10 дней.
В тканевых культурах, пораженных риккетсиями, на 3-8-ой день отмечается большое количество коккобациллярных форм, заполняющих целиком цитоплазму или ядро клеток, которые затем гибнут. Хламидии обнаруживают в препаратах клеток, окрашенных по Романовскому-Гимзе, в которых наблюдают различные формы размножающихся организмов.
5. Для выделения риккетсий и хламидий широко используется их культивирование в 8-12-дневном курином эмбрионе; материал вводят в полость желточного мешка или на хорион-аллантоисную оболочку. Зараженные яйца помещают в термостат при 37° С на 6-7 дней. Этот метод используется для массового накопления риккетсий при изготовлении риккетсиозных препаратов (вакцин, диагностических антигенов).
6. Для получения большого количества риккетсий их культивируют в организме чувствительных лабораторных животных – заражают интраназально белых мышей, в легких которых накапливается необходимое количество риккетсий.
7. Риккетсии выращивают по методу Вейгля и Мосинга: платяных вшей заражают взвесью риккетсий путем введения в кишку через анальное отверстие с помощью специальных капилляров. Пшеничнов и Райхер разработали метод культивирования риккетсий на личинках вшей, которых кормят дефибринированной кровью с риккетсиями через мембрану кожи трупа.
Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 946 | Нарушение авторских прав
|