АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

МЕТОДЫ СОЗДАНИЯ БЕСКИСЛОРОДНЫХ УСЛОВИЙ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ.

1. Для культивирования анаэробов необходимо создать условия анаэробиоза – пониженного содержания кислорода в среде и окружающем пространстве. Для этого используются физические, химические и биологические методы.

2. Физические методы основаны на физических и механических способах и приемах создания бескислородных условий. Для этого:

а) осуществляют посев в глубинуплотных питательных сред (кровяной или сахарный агар): посев уколом в высокий столбик агара (анаэробы вырастают в глубине посева); посев в глубину агара в пробирках или трубках Виньяля-Вейона: берут стеклянную трубку (длиной 30 см, d = 3-6 мм), один конец трубки вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого делают перетяжку и вставляют ватную пробку; исследуемый материал засевают в пробирки с расплавленным и охлажденным агаром, а затем засеянный агар насасывают в стерильные трубки Виньяля-Вейона; капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки, и трубки помещают в термостат;

б) выращивают анаэробные бактерии в специальных средах, содержащих редуцирующие вещества – глюкозу, муравьинокислый натрий, а также кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печени, селезенки, мозга, картофеля и др.).

Универсальной средой является среда Китта-Тароцци - это жидкая питательная среда, состоящая из сахарного бульона (0,5 % глюкозы) и кусочков животных тканей (например, печени, обладающей высокой способностью связывать кислород). Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения в течение 10-30 минут и быстро охлаждают, а после посева заливают слоем стерильного вазелинового масла. Эта среда используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выделенной чистой культуры.

в) выращивают анаэробные микроорганизмы в сосудах, из которых удаляют воздух или заменяют его индифферентным газом (азотом, водородом, СО₂); такими сосудами могут быть анаэростат или эксикатор, куда помещают посевы на чашках Петри с кровяным или сахарным агаром.

Анаэростат – толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой с резиновой прокладкой, снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения в анаэростате засеянных чашек Петри (крышкой вверх) из него удаляют воздух при помощи масляного насоса или вытесняют его газом из баллона (или аппарата Киппа).

3. Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (аппарате Аристовского) химическими веществами (такими как щелочной пирогаллол или гидросульфит натрия).

4. Биологические методы (метод Фортнера) основаны на совместном культивировании анаэробов с аэробами (S. aureus, S. marcescens). Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной 1см, получается два агаровых полудиска в одной чашке. На один из них засевают аэроб, а на другой – анаэроб. После посева чашки Петри герметически закрывают, используя пластилин или парафин (среду в чашки Петри наливают толстым слоем для сокращения воздушного пространства). Вначале в чашке Петри размножаются аэробы, а когда весь кислород в пространстве чашки будет использован, начинается рост анаэробов.

Различные метод создания анаэробиоза могут комбинироваться.

Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 971 | Нарушение авторских прав