АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБОВ.

1. Выделение чистой культуры анаэробных бактерий осуществляется в три этапа. При этом также получают чистую культуру из одной клетки и добиваются роста микроорганизмов в виде изолированных колоний с последующим ее пересевом.

2. Особенностью работы по выделению чистой культуры анаэробов является применение различных методов создания бескислородных условий (см. выше).

3. Три этапа заключаются в следующем:

Первый день. Исследуемый материал (земля, гной) засевают для накопления в среду Китта-Тароцци.

Второй день: а) просматривают посевы, приготавливают мазки и окрашивают по Граму (в положительном случае обнаруживают помутнение среды и пузырьки газа в ней, а также в мазках – крупные споровые грамположительные палочки); б) для получения изолированных колоний делают посев материала из среды Китта-Тароцци по методу Цейсслера, методу Вейнберга и методу Перетца.

Третий день: а) выросшие колонии изучают при помощи лупы и пересевают намеченную колонию в пробирку со средой Китта-Тароцци, которую помещают в термостат; б) проводят исследование чистой культуры анаэробов по морфологическим, культуральным, тинкториальным, биохимическим и антигенным признакам.

4. Посев по методу Цейсслера производят следующим образом: каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци наносят на кровяной сахарный агар в первую чашку Петри и растирают шпателем по поверхности среды; затем этим же шпателем втирают материал в среду второй и третьей чашек для получения изолированных колоний. Посевы помещают в анаэростат или аппарат Аристовского. На следующий день по форме колоний (при рассматривании через лупу) и микроскопии мазков из них производят ориентировочное определение вида микроорганизмов и пересев отдельных, намеченных колоний на среду Китта-Тароцци для получения чистой культуры, изучения ее свойств и точного определения вида микроорганизмов.

5. Посев по методу Вейнберга производят следующим образом: одну или две капли (петли) материала из среды Китта-Тароцци вносят в пробирку с бульоном для разведения материала. Затем пастеровской пипеткой с запаянным концом переносят материал последовательно в 3-5 узких пробирок с предварительно прокипяченным (20 мин.) и остуженным до 50°С сахарным МПА, погружая капилляр пипетки в расплавленный агар до самого дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают под струей водопроводной воды. При этом агар застывает и фиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток в глубине столбика агара.

Вместо узких пробирок могут быть использованы трубки Виньяля-Вейона. С их помощью можно произвести посев различных разведений почвенной взвеси для получения изолированных колоний. (Почвенную взвесь готовят следующим образом: к 1 г почвы прибавляют 100 мл стерильной воды в колбе на 250 мл, встряхивают на качалке 15 мин и отстаивают 5 мин; взвесь разбавляют в 10, 100 и 1000 раз, внося последовательно по 1 мл взвеси в пробирки с 9 мл стерильного 0,9 %-ного раствора NaCl.) В пробирки с 10 мл расплавленного и остуженного до 50°С сахарного МПА засевают по 0,1 мл полученных разведений почвенной болтушки (10³, 10⁴, 10⁵),быстро перемешивают и засасывают в стерильные трубки Виньяля-Вейона. Посевы помещают в термостат при 37° С.

6. Посев по методу Перетца производится следующим образом. Вначале готовят разведения исследуемого материала: запаянную пастеровскую пипетку погружают в исследуемый материал (почва, гной и т.д.) и переносят сначала в 3 пробирки с физиологическим раствором (5-10 мл), а затем последовательно в 3 пробирки с расплавленным и охлажденным до 45-50° С агаром по 18-20 мл в каждой. Внеся пипетку в среду, делают ею 1-2 вращательных движения, чтобы смыть посевной материал. Содержимое пробирок быстро перемешивают пастеровской пипеткой и выливают в 3 стерильные чашки Петри, на дно которых кладут стерильные стекла или спички, покрытые стерильными квадратными стеклами (6х6 см). Образуется капиллярная полость, куда быстро затекает расплавленный агар, и где создаются анаэробные условия.

Дата добавления: 2015-12-15 | Просмотры: 2391 | Нарушение авторских прав