АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы, получения различных компонентов крови у животных.

Взятие крови у мышей проводят после их наркоза. Для этого используют пол-литровую стеклянную банку с крышкой, в которую кладут клочок ваты, вливают небольшое количество эфира для наркоза, помещают туда мышь и закрывают крышкой. Наркоз продолжают до тех пор, пока мышь потеряет способность удерживаться на ногах. Затем препаровальными иглами ее прикалывают к доске брюшком вверх, дезинфицируют поверхность живота раствором карболовой кислоты и делают продольный раз­рез. Отпрепаровывают кожу, создавая емкость, возле передней лопатки. Стерильными глазными ножницами перерезают сосуды под лопаткой. Кровь вытекает в емкость, образованную складкой кожи, ее отсасывают стерильной пипеткой и переносят в неболь­шую пробирку. Таким образом можно получить 0,5...1 мл крови.

Взятие крови у морских свинок. На край уха свинки скаль­пелем наносят насечки или прокалывают ступни. Для предупре­ждения быстрого свертывания крови ушную раковину покрывают тонким слоем парафина. Так удается получить небольшое коли­чество крови. Кровь у морских свинок берут также и пункцией сердца. Животное при этом фиксируют животом вверх. Место введения иглы— область второго межреберья, 1...1,5 см от конца мечевид­ного отростка. На этом месте удаляют шерсть и дезинфицируют кожу; отступая от левого края грудины на 2 мм, вертикальным уколом прокалывают грудную клетку. Если игла попала в по­лость желудочка сердца, то кровь поступает в шприц (10 мл). Из сердца у крупных свинок можно получить 10...12 мл крови. По­сле взятия крови морской свинке необходимо ввести такой же объем физиологического раствора.

Взятие крови у кролика можно проводить из надреза на­ружной вены уха. Для этого выщипывают шерсть в районе про­хождения сосуда и поверхность уха смазывают ксилолом. Лезви­ем бритвы или скальпелем делают надрез вены. Таким путем можно получить до30...35 мл крови. После взятия крови живот­ному вводят подкожно физиологический раствор, по объему в 2 раза превышающий объем взятой крови.

Получение сыворотки. Кровь после взятия около часа вы­держивают в теплом месте(30...35°С), затем сгустокее обводят металлической палочкой (отделение сгустка от стенок сосуда) и ставят на ночь в холодильник. Сыворотку отса­сывают пипеткой с помощью груши, переносят в стерильный со­суд, фильтруют через асбестовые фильтры"СФ" и консервируют (метриолят натрия, тимол, азид натрия и др.).

Получение эритроцитов. Вначале готовят дефибринированную кровь. Для этого в стерилизованную сухим паром толсто­стенную банку со стеклянными бусами берут кровь и постоянно встряхивают, не давая ей свернуться. По окончании кровопуска­ния банку с бусами продолжают встряхивать еще 10 мин. Полу­ченную таким образом дефибринированную кровь фильтруют че­рез 2 слоя марли в центрифужные пробирки, центрифугируют 10...15 мин при 1500..-2000 об/мин, плазму крови отсасывают пи­петкой, к осадку эритроцитов доливают физиологический рас­твор, хорошо все перемешивают и снова центрифугируют. Эрит­роциты от сыворотки отмывают не менее трех раз до получения прозрачной надосадочной жидкости и до использования сохраня­ют в холодильнике (3—5 дней). Дополнительно в качестве стабилизирующих растворов от предотвращения свертывания крови можно использовать трилон Б, лимоннокислый натрий, гепарин и др.

Получение взвеси лейкоцитов. Кровь берут в стеклянную пробирку, в которую предварительно наливают 5%-ный раствор трилона Б из расчета 8 капель на 10 мл крови. Кровь хорошенько перемешивают. Затем отбирают 3 мл крови с антикоагулянтом и добавляют к ней цитратный гемостабилизатор (тринатрий цитрат —13,2 г, лимонная кислота —4,8 г, глюкоза—5,0 г, дистиллированная вода до 1 л) в количестве 1/7 объема, т.е. 0,4 мл. Этим добиваются подкисления крови дорН 6,5 для пре­дотвращения агрегации лейкоцитов с тромбоцитами и гранулоцитами.

Для удаления эритроцитов кровь обрабатывают гипотониче­скими растворами. Хорошие результаты дает 0,83-0,84%-ный раствор хлористого аммония, способный лизировать эритроциты, не разрушая лейкоциты. Раствор готовят на трис-НС1-буфере рН 7,6 или дистиллированной воде, фильтруют и добавляют к крови в соотношении9:1. Лизис эритроцитов наступает в течение 2...3 мин.Более эффективны свежеприготовленные растворы, по­догретые до37 °С. После лизиса эритроцитов суспензию центри­фугируют при500 об/мин в течение 5 мин так, чтобы осели лей­коциты, а тени эритроцитов и комплексы гемоглобина остались в надосадочной жидкости, которую сливают. Лейкоциты отмывают 2 раза раствором Хенкса и используют в дальнейшей работе.

Дата добавления: 2015-12-16 | Просмотры: 1502 | Нарушение авторских прав