АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Приложение 2. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВОЙ АНГИНЫ

Бактериологическое и иммуномикробиологическое обследование больных ангиной проводят в целях этиологического подтверждения клинического диагноза, контроля за полнотой освобождения реконвалесцентов от возбудителя и оценки возможного риска развития у переболевших ангиной ревматизма и острого гломерулонефрита.

Стрептококки группы А относятся к факультативным анаэробам с оптимальной температурой роста 37°С и рН=7,6-7,8. В питатель­ные среды для их культивирования добавляется дефибринированиая баранья или лошадиная кровь (в агаризованные среды – 5-7%) или лошадиная, крупного рогатого скота сыворотка (в жидкие среды – 10-20%).

В мазках из растущих бульонных культур стрептококки выявляются в виде длинных цепочек, в мазках с плотных питательных сред - в виде коротких цепочек, парных или разбросанных неправильных скоплений кокков. При росте на кровяном агаре стрептококки группы А так же, как и стрептококки некоторых других групп (В, С, G), вызывают бета-гемолиз. В результате бета-гемолиза вокруг колоний образуются прозрачные бесцветные зоны. Эритроциты в этих зонах полностью лизируются. Другой вид гемолиза (альфа-гемолиз) стреп­тококки группы А не вызывают. При альфа-гемолизе вокруг коло­ний образуется нечеткая зона частичного разрушения эритроцитов, часто с появлением зеленовато-коричневой окраски среды. Иногда наблюдается вариант альфа-гемолиза, когда непосредственно вокруг колоний образуется небольшой ореол из целых или частично лизированных эритроцитов, а к нему примыкает зона полного гемолиза, распространяющаяся далее в среду. При визуальном просмотре такой вариант альфа-гемолиза можно спутать с бета-гемолизом. В сомнительных случаях чашку с питательной средой (без добавления крови) инокулируют штрихом. Засеянную среду заливают 10 мл кровяного агара. После инкубирования при 37°С в течение 18-24 ч альфа- и бета-гемолиз при данной методике выражен более четко, поскольку колонии погружены в агар и это обеспечивает некоторую защиту гемолизинов, способных инактивироваться под действием кислорода. Для более выраженного роста колоний и получения более четкого гемолиза засеянные чашки можно инкубировать в атмосфере, содержащей до 10% углекислого газа. Для этого чашки с посевами помещают в эксикатор с плотно притертой крышкой или в анаэростат, на дно которых ставят зажженную свечу. По мере возрастания концентрации углекислого газа свеча гаснет, создавая благоприятные условия для роста стрептококков.

Групповая идентификация бета-гемолитических стрептококков основана на обнаружении группоспецифического полисахарида С с помощью различных иммунологических реакций (преципитации, латекс-агглютинации и др.). В качестве антигена выступают не цельные микробные клетки, а их экстракты, полученные после обработки центрифугата чистой культуры стрептококка кислотами (соляной или азотной) или различными ферментами.

Типирование стрептококков группы А по М-белку, липопротеиназе, с использованием групповых и типовых анти-Т диагностических сывороток в настоящее время малодоступно.

Для обеспечения микробиологической диагностики стрептококковой инфекции имеются в продаже все необходимые питательные среды и диагностикумы.

Кровяной агар и питательный бульон готовят на основе триптического перевара Хоттингера с содержанием аминного азота 7-8 г/л.

Кровяной агар

К 100 мл перевара Хоттингера добавляют 20,0 агар-агара, 5,0 хлористого натрия, 5,0 пептона и 900 мл дистиллированной воды, варят в течение 10-15 мин, доводят рН до 7,8, фильтруют через вату, разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при 120 °С (1 атм) 20 мин. Приготовленный питательный агар остужают до 45-50 °С и добавляют 5-7% (по объему) дефибринированной лошадиной или лучше бараньей крови. Человеческую кровь использовать для этих целей нельзя, так как она может содержать антибиотики или антитела к стрептококку, что вызовет угнетение роста возбудителя. Для угнетения роста посторонней микрофлоры целесообразно добавление генцианового фиолетового, кристаллического фиолетового в конечной концентрации 1:10⁶

Среды обогащения

Для диагностики можно использовать коммерческую селективную добавку для стрептококков (предприятие "БиолоТ", г. Санкт-Петербург), которую вносят в питательные среды с целью подавления роста сопутствующей микрофлоры. В качестве сред обогащения используют сахарный бульон для стрептококков (к 100 мл МПБ добавляют 1% глюкозы, стерилизуют в автоклаве при 111,8 ^оС (0,5 атм) 30 мин. В бульон непосредственно перед употреблением добавляют лошадиную (крупного рогатого скота) сыворотку до 10-20%) и среду для контроля стерильности (СКС), которые разливают в пробирки по 3-5 мл.

Дата добавления: 2016-03-26 | Просмотры: 600 | Нарушение авторских прав