АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Приложение 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИ-СТРЕПТОЛИЗИНА-О (АEstO) И АНТИ-ГИАЛУРОНИДАЗЫ (AEHyS)

Для подтверждения связи заболевания с патогенными стрептококками и полноты выздоровления наряду с бактериологическими исследованиями проводят иммунологические исследования.

Одним из чувствительных иммунологических методов диагностики при заболеваниях стрептококковой природы является определение в сыворотках крови больных титра анти-стрептолизина-О. Для проведения исследования используют парные сыворотки больных, взятые в начале заболевания и после выздоровления.

1. Препарат стрептолизина-О. Высушенный лиофильным методом препарат стрептолизина-О, содержащий восстановитель, непосредственно перед добавлением в пробирки растворяют в фосфатном буфере рН= 6,5-6,7, исходя из данных, указанных на этикетке. Разведенный таким образом препарат стрептолизина-О должен содержать в объеме 0,3 мл одну рабочую дозу, т.е. количество стрептолизина-О, которое почти полностью (++) нейтрализуется половиной международной единицы анти-стрептолизина-О стандарта ГКИ.

2. Фосфатный буфер рН= 6,5-6,7. На один литр дистиллированной воды добавляют 7,4 г NaCl; 3,17 г КН2РО4, 1,81 г NaНРО4х2Н2О и NaОН до рН=6,5-6,7. Хранят буфер при температуре 4-10^о С.

3. Взвесь эритроцитов. Дефибринированную кровь кролика, взятую из вены, наливают в центрифужные пробирки, отмечают уровень крови, центрифугируют и удаляют плазму. Эритроциты трехкратно промывают 0,85% раствором NaCl, взвесь тщательно размешивают и к 5 мл такой взвеси добавляют 95 мл фосфатного буфера рН= 6,5-6,7. Взвесь эритроцитов готовят в день постановки опыта.

4. Сыворотки больных. Кровь, взятую из пальца или локтевой вены больных в количестве не менее 0.5 мл, ставят на 15 мин в термостат, а затем в холодильник. Через 2-24 ч стояния при температуре 4-10^оС сыворотку отделяют от сгустка, прогревают 30 мин при температуре 56^оС и используют для титрования антител. Хилезные, гемолизированные и проросшие сыворотки не пригодны для титрования.

5. Разведение сывороток. Сыворотки больных разводят фосфатным буфером рН=6,5-6,7.

А. 1:50 плюс 2,0 мл буфера.

В. 1:1000 - 0,5 мл из разведения 1:250 плюс 1,5 мл буфера.

6. Титрование сыворотки. Разведенные сыворотки и другие ингредиенты разливают по пробиркам, как это указано в схеме титрования.

Титр сыворотки выражают числом АЕstО в 1 мл сыворотки. АЕstО-интернациональная единица анти-стрептолизина-О. В схеме титрования приведено число АЕstО в 1 мл при нейтрализации стрептолизина-О различными разведениями сыворотки.

Результаты титрования обозначают:

(+++) - положительная реакция - отсутствие гемолиза и в осадке эритроциты;

(++) - положительная реакция - частичный гемолиз;

(-) (+) - сомнительная реакция - почти полный гемолиз;

(-) - отрицательная реакция - полный гемолиз.

7. Контроль. Пробирки 12-я и 13-я служат для контроля эритроцитов и стрептолизина-О. Эритроциты не должны при учете реакции быть гемолизированы. Стрептолизин-О должен в дозе 0,3 мл рабочего разведения вызывать полный гемолиз 0,2 мл 5% взвеси эритроцитов кролика.

8. Оценка полученных результатов (Прил. 3, Табл. 1). Титр анти-стрептолизина-О до 250 АЕstО в 1мл обнаруживается у практически здоровых людей (титры анти-стрептолизина-О приведены в интернациональных единицах). Повышенные титры анти-стрептолизина-О обнаруживаются при ряде острых и хронических стрептококковых заболеваний (скарлатина, ангина, ревматизм, нефрит и др.). Повышение этих антител является показателем перенесенной стрептококковой инфекции. Особенно высоких титров достигают эти антитела при ревматизме и нефрите. Характерной особенностью этих двух заболеваний является обнаружение анти-стрептолизина-О в высоких титрах (500 АЕstO и выше) с первых дней заболевания, что может быть использовано в целях вспомогательного метода диагностики.

Приложение 3, Таблица 1

Дата добавления: 2016-03-26 | Просмотры: 627 | Нарушение авторских прав