Фактор VIII
Фактор VIII, гликопротеин, циркулирует в плазме крови в неактивной форме в виде комплекса с фактором Виллебранда, который защищает фактор VIII от деградации и стабилизирует его. В отсутствии фактора Виллебранда ф. VIII существует в плазме лишь несколько минут, а в комплексе с фактором Виллебранда - 8-12 ч. После активации тромбином ф. VIIIа отделяется от ф. Виллебранда.
Фактор VIIIа усиливает активацию ф. X в 10 000 раз.
Функция ф. VIII а заключается в том, что в качестве кофактора ф. IХа он активирует ф. X и многократно ускоряет процесс свертывания плазмы крови.
Ген, регулирующий синтез ф. VIII, подвержен частым мутациям, что приводит к образованию функционально неполноценного фактора и к возникновению тяжелого наследственного заболевания - гемофилии А, которая встречается у 1 из 10000 мужчин. Заболевание характеризуется спонтанными, нередко смертельными кровотечениями, кровоизлияниями в суставы, ведущими к ранней инвалидности. Уже при снижении дефицитного фактора до 30% (норма - 50-200%) заболевание проявляется в скрытой форме и обна-
11 руживается после оперативных вмешательств в виде профузных кровотечений. Эти больные в течение всей жизни нуждаются в заместительной терапии препаратами плазмы. Гемофилия А расценивается:
■ как тяжелая - при уровне ф. VIII в пределах 0-1%;
■ средней тяжести - при уровне ф. VIII в пределах 1 -5%; " легкая - при уровне ф. VIII в пределах 5-24%;
■ скрытая - при уровне ф. VIII в пределах 24-49%.
В качестве антигемофильных лекарственных средств применяют криопреципитат, свежезамороженную плазму и различные концентраты ф. VIII, полученные из криопреци-питата или генно-инженерными методами.
Плазма свежезамороженная (СЗП) - это лекарственное средство, приготовленное из цельной крови или из плазмы, заготовленной плазмаферезом, и замороженное в такие сроки и при такой температуре, чтобы сохранялись в функциональном состоянии лабильные факторы свертывания. Активность ф. VIII в СЗП должна быть не менее 0,7 МЕ/мл.
Криопреципитат - это препарат из свежезамороженной плазмы крови человека, представляющий собой сконцентрированную до объема 10-20 мл криоглобулиновую фракцию плазмы от одного донора. Криопреципитат должен содержать в одной дозе (10-20 мл) не менее 70 МЕ активности ф. VIII. Кроме ф. VIII, криопреципитат содержит примеси (фибриноген, фактор Виллебранда, ф. ХIII, фибронектин), которые могут вызвать побочные реакции у реципиентов.
Концентраты ф. VIII - высокоочищенные препараты, получаемые из криопреци-питата с помощью ионообменной хроматографии или генно-инженерными методами, имеющие высокую удельную активность ф.VIII - до 100 МЕ/мг белка и выше.
Очевидно, что для достоверной диагностики гемофилии и при лечении больных чрезвычайно большое значение приобретает метод определения активности дефицитного фактора в плазме крови пациентов.
В настоящее время существуют 3 метода определения активности ф. VIII одностадийный метод, двухстадийный метод и метод с хромогенным субстратом. Наиболее простой и наиболее широко распространенный одностадийный метод основан на проведении теста АЧТВ, двухстадийный метод основан на определении времени генерации тромбо-пластина и более сложен по исполнению. Метод с хромогенными субстратами - является непрямым методом, имеющим естественные ограничения.
Учитывая вышеизложенное, было решено использовать для исследований именно одностадийный метод определения активности ф. VIII в плазме крови человека.
В основу метода были положены принципы стандартизации, сформулированные в Национальном институте стандартов и контролей (NIВSС), Великобритания. Основные принципы стандартизации следующие:
- наличие стандартов;
- калибровка «подобное подобным»;
- независимость результатов от метода исследования;
- линейность и параллельность калибровочного графика и графика исследуемой плазмы, позволяющие уменьшить ошибку анализа;
- оценка случайной ошибки (методами математической статистики);
- учет фактора времени (одномоментный анализ калибратора и исследуемой плазмы).
За Международную единицу биологической активности ф. VIII принята активность, присутствующая в 1,0 мл свежей нормальной плазмы. Основная трудность такого выражения активности - это большая вариабельность активности ф. VIII в нормальной популяции.
Разработка коммерческих препаратов концентрата ф. VIII привела к необходимости создания эталона, относительно которого коммерческие препараты также могли быть стандартизованы.
Первый международный стандарт ф. VIII был создан в 1971 г. Этот стандарт был препаратом концентрата ф. VIII средней степени очистки и был предназначен для калибровки коммерческих препаратов. Впоследствии этот стандарт несколько раз видоизменялся в зависимости от разработки новых методов очистки, и последний (88/804) был создан на основе технологии моноклональных антител.
Однако Международный стандарт в виде концентрата ф. VIII оказался непригодным для исследования активности ф. VIII в плазме, и для этой цели в 1982 г. был приготовлен специальный стандарт плазмы с аттестованным содержанием ф. VIII (3 13 91/666), что соответствовало принципу "подобное подобным".
Дата добавления: 2015-07-23 | Просмотры: 838 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 |
|