АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Количественное определение

Прочитайте:
  1. Вакцины, определение. Классификация. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.
  2. Здоровье, философское, биологическое и этическое определение. Определение здоровья согласно ВОЗ
  3. Количественное определение
  4. Количественное определение
  5. Количественное определение глюкозы в крови глюкозооксидазным методом
  6. Количественное определение микроорганизмов методом непосредственного (прямого) подсчёта
  7. Количественное определение СГ в ЛРС.
  8. Количественное определение содержания в плазме крови до и после агрегации тромбоцитарных факторов
  9. Количественное определение фактора Виллебранда (по Evans и Osten в модификации Б.Ф.Архипова, Л.З. Баркагана Л.В. Марамзиной (1982 г.)
  10. Количественное определение ферментов

1. Химические методы

А). Определение природных пенициллинов

Методика состоит из двух этапов. На первом этапе определяют сумму пенициллинов, на втором – конкретный препарат.

Определение суммы пенициллинов.

Проводят с помощью метода обратной иодометрии после щелочного гидролиза.

Навеску препарата растворяют в воде, добавляют 1М раствор едкого натра и оставляют на 20 минут. Затем добавляют 1М хлористоводородную кислоту, ацетатный буфер (рН 4,50±0,05), 0,01М раствор иода и оставляют на 20 минут. Избыток иода оттитровывают 0,01М раствором натрия тиосульфата.

Параллельно ставят контрольный опыт с тем же разведением того же вещества, но без проведения стадии щелочного гидролиза. При этом учитывается количество так называемых иодсорбируемых примесей.

Кроме того, параллельно проводят определение стандартного образца натриевой соли бензилпенициллина или феноксиметилпенициллина, в случае, если анализируемый препарат – феноксиметилпенициллин. Титр иода по ГСО натриевой соли бензилпенициллина или ГСО феноксиметилпенициллина устанавливают по таблице, приведенной в ГФХ с учетом температуры процесса.

При окислении пенальдиновой кислоты до фенилацетиламиномалоновой кислоты происходит переход 2 электронов, т.о. фактор эквивалентности при этом равен 1/2. При окислении пеницилламина до пеницилламиновой кислоты происходит переход 6 электронов, т.о. фактор эквивалентности при этом равен 1/6. В сумме происходит переход 8 электронов и фактор эквивалентности равен 1/8.

Пеницилламиновая кислота
Фенилацетиламиномалоновая кислота
Пенальдиновая кислота
Пеницилламин
Соль бензилпенициллина
Динатриевая соль пенициллоиновой кислоты
Соль бензилпенициллина

Необходимо отметить, что, в действительности невозможно предсказать точный механизм окисления пенициллинов и реальный фактор эквивалентности составляет от 1/6 до1/9 в зависимости от температурных условий окислений и его продолжительности. В условиях, предлагаемых ГФХ доказано, что средний фактор составляет 1/8.

 

Расчет суммы пенициллинов проводят по формуле:

 

, где

 

Э – титр иода по ГСО бензилпенициллина натриевой соли или титр иода по феноксиметилпенициллину;

Vk – объем тиосульфата натрия, пошедшего на титрование в контрольном опыте;

Vо - объем тиосульфата натрия, пошедшего на титрование в опыте;

К – поправочный коэффициент тиосульфата натрия;

С – коэффициент пересчета ГСО бензилпенициллина натриевой соли на исследуемый пенициллин.

 

Содержание суммы пенициллинов в солях бензилпенициллина должно быть не менее 96%.

Аналогично определяют содержание феноксиметилпенициллина. Препарат растворяют в фосфатном буфере с рН=7,0, дальее поступают так же как и при определении бензилпенициллина. Сначала определяют % феноксиметилпенициллина в ГСО, а затем рассчитывают содержание феноксиметилпенициллина в анализируемом образце.

 

, где

А- содержание феноксиметилпенициллина в ГСО.

Содержание суммы пенициллинов в феноксиметилпенициллине должно быть не менее 95%.

Определение конкретного препарата.

Определение бензилпенициллина.

Навеску препарата растворяют в воде, добавляют раствор фосфорной кислоты и экстрагируют выделившийся бензилпенициллин амилацетатом. Затем амилацетатный слой отделяют, сушат над безводным сульфатом натрия и добавляют к нему раствор N-этилпиперидина в амилацетате. При этом выпадает осадок N-этилпиперидиновой соли бензилпенициллина, который отфильтровывают, сушат в вакууме и взвешивают.

Затем, с помощью коэффициентов, приведенных в ГФХ рассчитывают количество соответствующей соли бензилпенициллина.

В препаратах калиевая, натриевая, новокаиновая соль бензилпенициллина, а также бензатина бензилпенициллин должно содержаться не менее 90% основного вещества.

В препарате феноксиметилпенициллина содержание феноксиметилпенициллина определяют УФ-спектрофотометрическим методом при длине волны 268 нм с использованием удельного показателя поглощения. Растворитель – 5% раствор гидрокарбоната натрия.

В препарате феноксиметилпенициллина должно содержаться не менее 90% основного вещества.

Кроме этого в препаратах новокаиновая соль бензилпенициллина и бензатина бензилпенициллин количественно определяют катионный фрагмент - новокаин или N,N’-дибензилэтилендиамин.

При определении новокаина в препарате новокаиновая соль бензилпенициллина навеску препарата растворяют 10% растворе карбоната натрия и новокаин экстрагируют хлороформом. Затем к экстракту добавляют избыток 0,01М раствор серной кислоты, после чего в водном слое определяют избыток кислоты титрованием 0,01М раствором гидроксида натрия (индикатор - метиловый красный). Содержание новокаина в препарате новокаиновая соль бензилпенициллина должно быть от 37,5 до 40,5%.

При определении N,N’-дибензилэтилендиамина в препарате бензатина бензилпенициллин, экстракцию N,N’-дибензилэтилендиамина проводят эфиром после обработки препарата раствором гидроксида натрия. Затем эфир отгоняют, остаток растворяют в ледяной уксусной кислоте и титруют 0,М раствором хлорной кислоты с индикатором 1-нафтолбензеин (МФ). Содержание N,N’-дибензилэтилендиамина в препарате бензатина бензилпенициллин должно быть от 24 до 27%.

Б). Определение полусинтетических пенициллинов

В препаратах оксациллина натриевая соль и карбенициллина динатриевая соль на первом этапе определяют сумму пенициллинов методом обратной алкалиметрии. Для этого навеску препарата нагревают на водяной бане с 0,1М раствором гидроксида натрия в течение 0,5 часа, после чего охлаждают и определяют избыток гидроксида натрия титрованием 0,1М раствором хлористоводородной кислоты.

Пенициллоиновой кислоты динатриевая соль

 

Определение конкретного препарата проводят с помощью метода спектрофотометрии с использованием соответствующего ГСО.

В препаратах амоксициллина и ампициллина определение суммы пенициллинов не проводят, а определяют только основное вещество методом спектрофотометрии с ГСО.

При спектрофотометрическом определении препаратов ампициллина по ФС к препаратам добавляют раствор сульфата меди в фосфатном буфере (рН=5,20±0,05) и нагревают смесь на водяной бане 30 минут. Затем определяют оптическую плотность раствора при длине волны 320 нм. Параллельно аналогично определяют соответствующий ГСО.

При этом происходит гидролиз препаратов с образованием пеницилленовых кислот.

 

Пеницилленовые кислоты

 

 

Нефармакопейные методы

1. Фотоэлектроколориметрия по образованию гидроксамата железа.

2. Формольное титрование по Серенсену (препараты ампициллина – по образующейся α-аминокислоте - фениламиноуксусной кислоте).

 

2. Биологические методы

Используют метод диффузии в агар с тест-микробом – Staphylococcus aureus.

Средняя величина активности должна быть не менее 1670 ЕД/мг в пересчете на сухое вещество.

 


Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 2194 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.005 сек.)