 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Количественное определение микроорганизмов методом непосредственного (прямого) подсчётаСущность метода состоит в том, что количество микроорганизмов опре-деляют путём прямого счёта их под микроскопом. Положительной стороной этого метода является простота и быстрота получения результата. Метод широко применяется в практике микробиологических исследований. Например, свежесть мяса и рыбы определяется прямым микроскопированием мазков-отпечатков, взятых с продукта (бактериоскопия); аналогично устанав-ливается присутствие посторонней микрофлоры в кисломолочных продуктах; метод широко используется при оценке качества пива, прессованных хлебо-пекарных дрожжей. Этот метод рекомендуется использовать для подсчёта крупных объектов-дрожжей, конидий грибов и некоторых относительно крупных бактерий. Опре-деление количества микроорганизмов методом прямого подсчёта производят в специальных счетных камерах Горяева-Тома (Рис. 15). Рисунок 15. Счётная камера Горяева-Тома: А-вид сверху; Б-вид сбоку; В-при малом увеличении микроскопа
Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, разделенное бороздками. На центральную часть стекла нанесена сетка. Площадь квадрата сетки указана на одной из сторон предметного стекла и соответствует 1/25 мм2 (большой квадрат) или 1/400 мм2 (малый квадрат). Часть предметного стекла, на которой нанесена сетка, на 0,1 мм ниже двух других сторон. Это глубина камеры; она всегда указывается на предметном стекле. При работе с камерой необходимо соблюдать определенный порядок ее за-полнения. Вначале углубление с сеткой покрывают специальным шлифованным покровным стеклом и, слегка прижимая, смещают покровное стекло в противо-положные стороны до появления колец Ньютона. Это указывает на то, что пок-ровное стекло притерто к сторонам камеры. Только при таком условии объем взвеси микроорганизмов, находящийся в камере, соответствует расчетному. После этого камеру заполняют исследуемой суспензией микроорганизмов. Суспензию вносят через бороздку камеры капилляром или пипеткой. Подсчет клеток рекомендуется начинать через 3—5 мин после заполнения камеры, что-бы клетки осели и при микроскопировании были видны в одной плоскости. Подвижные клетки перед заполнением камеры убивают нагреванием или сус-пендированием в 0,5%-ном водном растворе формалина. Число клеток подсчитывают с объективом 8 X или 40 X. С иммерсионным объективом работать нельзя, так как его фокусное расстояние меньше толщины стекла камеры. Обычно подсчитывают клетки микроорганизмов в 10 больших или 20 маленьких квадратах сетки, перемещая последние по диагонали. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также клетки, пересекающие верх-нюю и правую стороны квадрата. При подсчете количество клеток в большом квадрате не должно превышать 20, а в малом—10, в противном случае исходную суспензию разводят водопроводной водой. Для получения достоверного результата общее число подсчитанных клеток микроорганизмов должно быть не менее 600. Точность определения зависит от того, насколько плотно пришлифовано покровное стекло к поверхности камеры, поэтому подсчет клеток повторяют 3—4 раза, каждый раз заново монтируя камеру и заполняя ее исследуемой взвесью микроорганизмов. Это обеспечивает большую точность, чем подсчет 600 клеток при однократном монтаже камеры. Количество клеток в 1мл исследуемой суспензии вычисляют по формуле: а •103 п, [6.1] М = h S
где М —число клеток в 1 мл суспензии; а — среднее число клеток в квадрате сетки; h — глубина камеры в мм; S—площадь квадрата сетки в мм2; 103 — коэффициент перевода см3 в мм3; п — разведение исследуемой суспензии.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 814 | Нарушение авторских прав |