АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Определение количества клеток высевом в жидкие среды

(метод предельных разведений).

Метод нашел широкое применение для под­счета микроорганизмов, которые плохо или совсем не развиваются на плотных питательных средах. Этим же методом пользуются при опре­делении численности бактерий, относящихся к той или иной физиоло­гической группе. Сущность метода предельных разве-дений состоит в следующем. В пробирки с жидкой средой вносят строго из-меренный объём из различных разведений исследуемого субстрата (рис.19). После инкубации, исходя из числа пробирок, в которых наблюдался или от-сутствовал рост, рассчитывают по таблицам наиболее вероятное число клеток, содержащихся в 1 мл исходного субстрата. Необходимо отметить, что опреде-ление численности клеток чашечным методом обеспечивает большую точность по сравнению с методом предельных разведений.

Рисунок19 . Схема проготовления разведения и посев суспензии микроорганизмов в жидкую среду

Определение количества микроорганизмов методом предельных разведений включает приготовление разведений, посев в жидкую среду, регистрацию на-личия или отсутствия роста после инкубации и расчет наиболее вероятного числа клеток в единице объема исходного субстрата.

Приготовление разведений. Разведения исходной суспензии готовят точно так же, как и для чашечного метода.

Посев в среду и регистрация результатов.. Питательную среду, благопри-ятную для развития микроорганизмов, численность которых хотят определить, предварительно разливают в пробирки (колбы) и стерилизуют. В пробирки (колбы) следует наливать одинаковый объем среды. Посев проводят из каждого разведения или из четырех-пяти последних, причем каждое разведение высе-вают в 3—5 параллельных пробирок. Количество посевного материала везде одинаково и, как правило, составляет 1 мл. Засеянные пробирки помещают в термостат. Время инкубации колеблется от 3 до 10 суток и зависит от скорости роста микроорганизмов, численность которых определяют. После инкубации регистрируют рост микроорганизмов, используя различные показатели: помут-нение среды, образование пленки, осадка, газа или накопление в среде опреде-ленных продуктов метаболизма.

Наиболее вероятное количество клеток в единице объема рассчитывают по таблице Мак-Креди (табл. 4), разработанной на основании методов вариаци-онной статистики. Для этого первоначально составляют числовую характерис-тику, которая включает три цифры. Первая цифра слева показывает число про-бирок в том последнем разведении, при высеве из которого во всех засеянных пробирках был отмечен рост. Две следующие цифры обозначают число проби-рок, в которых отмечен рост микроорганизмов при засеве их из двух последу-ющих разведений. Затем по таблице находят наиболее вероятное число микро-организмов, соответствующее данному значению числовой характеристики. Количество микроорганизмов в 1 мл (1 г) исходного субстрата соответствует этому числу, умноженному на то разведение, которое было взято для получения первой цифры числовой характеристики.

Пример 1

Разведение исходной суспензии ………………….0 10^-1 10^-2 10^-3 10^-4

Число засеянных пробирок………………………….4 4 4 4 4

Число пробирок, в которых обнаружен рост ………4 4 3 1 0

Числовая характеристика 431 - - - -

Наиболее вероятное число клеток микроорганизмов 16,5 - - - -

Количество клеток микроорганизмов в 1 мл ис-

ходной суспензии…………………………………….. 165 - - - -

Пример 2

Разведение исходной суспензии ………………….10^-2 10^-3 10^-4 10^-5 10^-6

Число засеянных пробирок…………………………. 3 3 3 3 3

Число пробирок, в которых обнаружен рост ……… 3 3 2 0 0

Числовая характеристика 320 - - - -

Наиболее вероятное число клеток микроорганизмов 9,5 - - - -

Количество клеток микроорганизмов в 1 мл ис-

ходной суспензии…………………………………….. 9,5• 10³ - - -

Таблица 4

Наиболее вероятное количество клеток микроорганизмов в единице объёма исходной суспензии (по Мак-Креди)

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Провести посев суспензии бактерий на агаризованную питательную среду для определения количества жизнеспособных клеток методом Коха.

2. Определить количество дрожжевых клеток в 1 г прессованных хлебопекарных дрожжей с помощью камеры Горяева

ТЕМА № 7. Возбудители бактериальных кишечных инфекций

Знание биологических особенностей возбудителей ОКИ, брюшного тифа, паратифов важно для понимания технологом и товароведом необходимости соблюдения санитарно-гигиенических требований, обеспечивающих исклю-чение инфицирование пищевых продуктов микроорганизмами-возбудителями пищевых отравлений.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ

Освоение микробиологическдиагностики эшерихиозов, дизентерии, сальмонеллезов, брюшного тифа, паратифов.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ

Морфологические, физиологические и экологические особенности эшерихий, шигелл, сальмонелл.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ

1. Приготовить препарат для микроскопирования кишечной палочки.

2. Описать рост кишечной палочки на средах Эндо и Левина.

Эшерихии

Термином эшерихиозы обозначают группу инфекционных заболеваний, вы-зываемых микроорганизмами рода Escherichia. Более чем в 99 % случаев воз-будителем эшерихиозов является Escherichia coli (около 1 % инфекций этой группы вызывают Escherichia ferqusonii, Escherichia hermanii, Escherichia vul-neris). Кишечные инфекции, занимающие ведущее положение в структуре эше-рихиозов, связаны с четырьмя различными группами E.coli: энтеротоксиген-ными (ЭТКП), энтероинвазивными (ЭИКП), энтеропатогенными (ЭПКП) и энтрогеморрагическими (ЭГКП) кишечными палочками. Штаммы этих групп различаются, прежде всего, по факторам патогенности, а также по клиническим проявлениям заболеваний, возбудителями которых они являются.

Энтеротоксигенные штаммы E.coli вызывают диарею с выраженным болевым синдромом за счет воздействия на ганглиозидные рецепторы энтероцитов про-дуцируемых микроорганизмами термолабильного и термостабильного энтеро-токсинов, что приводит к активизации аденилатциклазной системы, внутрикле-точному накоплению циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) и, как след-ствие, секреции жидкости и электролитов в просвет кишечника.

Энтероинвазивные E.coli, имеющие значительное сходство с микроорганиз-мами рода Shigella по биохимическим и антигенным свойствам, а также прояв-лению вирулентности, способствуют развитию заболеваний, протекающих по типу острой дизентерии.

Энтеропатогенные эшерихии, группируемые в два класса на основе харак-тера взаимодействия с клеточными культурами Hep-2 и Hela, колонизируют эпителий слизистой оболочки тонкой кишки, вызывая возникновение эрозий на его поверхности. Наличие у микроорганизмов плазмидокодируемого О-поли-сахарида с молекулярной массой 54 мДа способствует антифагоцитарной устой-чивости возбудителей и развитию бактериемии.

В настоящее время в качестве самостоятельной группы выделяют так назы-ваемые энтероадгезивные или аутоагглютинирующиеся штаммы E.coli, однако их роль в развитии инфекций ЖКТ выяснена не до конца.

Лабораторная диагностика кишечных инфекций, вызванных E.coli, заключа-ется в выделении чистых культур возбудителя. В качестве образцов для иссле-дования используют фекалии, рвотные массы, мочу, гной, кровь, спинномозго-вую жидкость. При необходимости исследованию подвергают промывные воды, остатки пищи, смывы с рук персонала.

Колонии эшерихий имеют на среде Эндо круглую форму, ровный край, матовую поверхность и малиново-красный цвет без металлического блеска, за-висящий от способности культур расщеплять лактозу (рис. 20). На среде Левина колонии E.coli имеют темно-синий цвет.

Рисунок 20. Культура бактерии E.coli на среде Эндо

Шигеллы

Термином бактериальная дизентерия (шигеллез) обозначают инфекционное заболевание с поражением, главным образом, толстого кишечника, вызываемое микроорганизмами рода Shigella. Этот термин был предложен Гиппократом для обозначения кровавого поноса. Это короткие (1-3 мкм) грамотрицательные палочки без спор и капсул. К настоящему времени известно 4 вида шигелл: S.dysenteriae, S.flexneri, S.boydii, S.sonnei. Заболевание контагиозно, что приво-дит к эпидемическим вспышкам. Особенно опасно появление больных дизен-терией в организованных коллективах. Шигеллы способны размножаться и накапливаться в пищевых продуктах, особенно молоке. Сохраняются во внешней среде относительно недолго. На овощах и фруктах- до 2 недель, в воде и почве – до 3 месяцев.

Сальмонеллы

Сальмонеллы — короткие грамотрицательные палочки с закругленными кон-цами, длиной 1,5-4 мкм. В большинстве случаев подвижные (перитрихи), спор и капсул не имеют. Род сальмонелл включает виды: S.enterica с семью основными подвидами и S.bongori, которые различаются по ряду биохимических призна-ков. Сальмонеллы устойчивы к низким температурам, к высушиванию, спо-собны длительно сохраняться в пищевых продуктах и окружающей среде. Возбудители брюшного тифа и паратифов — S.typhi, S.paratyphi A, S.paratyphi B, грамотрицательные палочки размером 1-3,5х0,5-0,8 мкм, перитрихи. Рост на бульоне сопровождается помутнением, на МПА образуются нежные круглые, гладкие полупрозрачные колонии диаметром 2-4 мм. На среде Эндо все коло-нии бесцветны (рис. 21), на висмут-сульфит-агаре — черные. Избирательная среда — желчный бульон.

Заболевание распространено повсеместно, ежегодно в мире регистрируется несколько миллионов случаев брюшного тифа.

Рисунок 21. Рост сальмонелл на среде Эндо

ТЕМА № 8. Основы санитарной микробиологии

Будущему товароведу и технологу необходимо знание основ санитарной микробиологии.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ

Ознакомление студентов с основными методами санитарно-микробиологи-ческих исследований.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ

1. Основные понятия и термины санитарной микробиологии.

2. Методы санитарно-микробиологических исследований объектов внешней среды.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ

Осуществлять отбор проб воды, воздуха, продуктов питания для после-дующего санитарно-бактериологического исследования.

Основные понятия и термины санитарной микробиологии

Объектами санитарно-микробиологического исследования являются вода, воз­дух, почва и другие объекты окружающей среды, а также пищевые продукты, обо­рудование пищеблоков и т.п.

По видовому составу биологические загрязнения подразделяется на:

· загрязнения патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, цианобактериями и микроорганизмами, предназначенными для борьбы с насекомыми, микроорганизмами–продуцентами токсических веществ;

· загрязнения биологическими веществами: антибиотиками, белками, ферментами, витаминами.

Наиболее существенными с точки зрения размера наносимого ущерба яв­ляются следующие биологические загрязнители:

· хозяйс­т­венно-бытовые и сточные воды;

· отходы животноводческих ком­плексов;

· от­хо­ды про­мыш­ленных предприятий по производству
антибиотиков, вакцин, сыво­роток, белков, витаминов,
ферментов и т.п.

· массовое развитие в воде открытых водоемов сине-зеленых водорослей;

Для каждого вида загрязнения должны быть определены предельные до­пустимые концентрации (ПДК), т.е. такие, которые не влияют отрицательно на процессы самоочищения внешней среды, не подавляют санитарно-показательные микроорганизмы, не усиливают их патогенные свойства, не удлиняют сроки выживания микроорганизмов и не способствуют ухудшению здоровья людей.

Санитарная микробиология располагает двумя методами, с помощью которых можно определить санитарно-эпидемиологическое состояние внешней среды — прямое обнаружения патогенных микроорганизмов во внешней среде и косвенная индикация возможного их присутствия во внешней среде.

Первый метод является более надежным, но трудоемким и недостаточно чувствительным. Второй метод (косвенной индикации) более прост и доступен. Этот метод располагает двумя показателями — критериями, которые позволяют определить санитарно-эпидемиологическую ситуацию. К ним относят общее микробное чис­ло и концентрацию санитарно-показательных микроорганизмов.

Общее микробное число (ОМЧ ) — это число всех микроорганизмов в 1 миллилитре — мл (см³) или в 1 грамме — (г) субстрата. При этом исходят из предположения, что чем больше микроорганизмов обнаруживается во внешней среде, тем вероятнее за­грязнение внешней среды патогенными микро­орга­низ­мами.

ОМЧ определяют при контроле очистки воды, в том числе колодезной, проверке эффективности мойки посуды, воздуха в кондитерских цехах и т.п, определении показателя свежести скоро­портящихся продуктов, исследовании почвы, при выборе места для строительства объектов питания. ОМЧ используют для определения характера микрофлоры. Если в пищевом продукте, прошедшем термическую обработку, обнаруживаются ве­гетативные формы микроорганизмов, то это свидетельствует о повторном зара­же­нии продукта после термической обработки или об ее неэффективности. Обна­ружение спор подтверждает удовлетвортельную термическую обработку.

Термин санитарно-показательные микроорганизмы (СПМО) обозначает такие микроорганизмы, которые постоянно оби­тают в естественных полостях тела человека (животных) и постоянно выделяются во внешнюю среду.

Чем выше концентрация СПМО, тем больше вероятность присутствия патогенных микроорганизмов. Количество СПМО выражают в титрах и индексах.

Титр — это минимальное количество субстрата (в мл или г), в котором еще обнаруживаются СПМО.

Индекс — это количество СПМО, которое содержится в 1 л воды или в 1 мл другого субстрата.

Наиболее вероятное число (НВЧ) означает количество СПМО в 1 л для воды или в одном г (мл) для другого субстрата. Это бо­лее точный показатель, т.к. он имеет доверительные границы, в пределах которых может колебаться с вероятностью 95%.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 2475 | Нарушение авторских прав