АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Концентрация IgE в сыворотке крови здоровых людей

Высокочувствительными методами иммунологических исследований, позволяющими определять даже низкие концентрации IgE (менее
50 МЕ/мл) являются:

1. Иммуноферментный анализ (ИФА). Для количественного определения уровня общего IgE применяют твердофазный ИФА (рис. 6), при котором антитела к IgE сорбированы на твердом носителе, например,
в лунках планшет из полистирола. Образовавшийся при введении исследуемой сыворотки комплекс выявляют добавлением соответствующих
им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой и или щелочной фосфатазой).

Рис. 6. Принцип постановки ИФА для определения IgE

После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции; интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и меченых антител. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют не связавшиеся реагенты путем промывания. Учет интенсивности реакций опытных и контрольных проб проводят на планшетном спектрофотометре (ИФА-ридере) по величине поглощения света с определенной длиной волны (для хромогена ТМБ (тетраметилбензидин) она составляет 450 нм).

2. Хемилюминесцентный («сэндвич») анализ с применением
парамагнитной метки.

К сыворотке крови пациента добавляют анти-IgE-АТ, меченные люминесцентной меткой (эфиром акридина). После отмывки несвязавшихся антител добавляют анти-IgE-антитела, ковалентно связанные с парамагнитными частицами. Для учета необходимо специальное измерительное устройство, которое включает фотометр и электрод с магнитом. Магнит захватывает парамагнитные частицы, связанные с IgE-конъюгатами,
в результате электрохимической реакции происходит люминесценция метки, которая измеряется фотометрически. Примерами таких устройств являются системы ACS:180 (Ciba Corning Diagnostics Corp.), NPD (Calgon Vestal Laboratories), Clorox (Clorox Company). Метод является высокочувствительным и позволяет определять концентрацию общего уровня IgE
в диапазоне 1,5–3000 кЕ/л.

3. Радиоиммунный анализ (РИА) — метод, основанный на мечении одного из компонентов иммунологической реакции (антигена или
антитела) радиоактивным изотопом I¹²⁵. Для количественного определения уровня общего IgE применяют непрямой или конкурентный твердофазный РИА (на твердой фазе иммобилизированы захватывающие антитела против IgE человека). В последнем случае в систему одновременно вносят сыворотку пациента и определенное количество IgE, меченного I¹²⁵. В результате реакции происходит связывание данного компонента, обратно пропорциональное содержанию IgE в сыворотке пациента.
Результаты оценивают с помощью гамма-счетчика по радиоактивности образующихся иммунных комплексов.

Поскольку РИА требует дорогостоящего оборудования и реактивов, а также условий для работы с радиоактивными изотопами, он мало
используется в настоящее время.

Дата добавления: 2015-11-26 | Просмотры: 519 | Нарушение авторских прав