АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Протокол метода

1. Зарегистрировать перечень реакций по каждому анализу в рабочий журнал, включая положительный и отрицательный контроль. Промаркировать микропробирки.

2. Внести 25 мкл суспензии мононуклеаров (3х106/мл) в конические микропробирки.

3. Добавить 10 мкл раствора инактивированной кроличьей сыворотки, ресуспендировать клеточную взвесь.

4. Инкубировать при 18 – 20оС в течение 20 мин.

5. Внести специфические антитела в рабочей концентрации, ресуспендировать клеточную взвесь.

6. Инкубировать при 4оС в течение 30 мин.

7. Отмыть в ЗФФР 1 раз (центрифугировать при 400 g в течение 5 мин).

8. Добавить 10 мкл раствора инактивированной кроличьей сыворотки, ресуспендировать клеточную взвесь.

9. Инкубировать при 4оС в течение 5 мин.

10. Подготовить предметное стекло с парафилмом ex tempore:

1. внести 20 мкл поли-L-лизин в лунки из парафилма

2. инкубировать стекло при 37оС в течение 30 мин

3. удалить остатки поли-L-лизина и поместить стекло в стаканчик с ЗФФР до использования (не допускать высыхания).

11. Внести 20 мкл флюороохромированных антител, ресуспендировать клеточную взвесь.

12. Инкубировать при 4оС в течение 30 мин.

13. Отмыть в ЗФФР 2 раза (центрифугировать при 400 g по 5 мин).

14. Внести 20 мкл 30% глицерина, тщательно перемешать клеточную взвесь с глицерином.

15. Перенести клетки во влажные лунки предметного стекла.

16. Инкубировать клетки на стекле во влажной камере при 4оС не менее 30 мин.

17. Хранить препараты во влажной камере при 4оС. Допускается хранение препаратов до 6 дней.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 457 | Нарушение авторских прав