АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Принцип метода

Принцип метода основан на различии в плавучей плотности форменных элементов крови. Смесь полисахарида фиколла и рентгеноконтрастного вещества изопак или верографин создает градиент с такой плотностью, которая позволяет при центрифугировании разделить клетки периферической крови и костного мозга на мононуклеарную фракцию (МФ), в которую входят лимфоциты, субпопуляция моноцитов и бластные гемопоэтические клетки, и фракцию, содержащую гранулоциты и эритроциты. МФ обладают меньшей, чем градиент, плотностью и располагаются над градиентом. Плотность гранулоцитов и эритроцитов больше, чем плотность градиента, они проходят через градиент, опускаясь на дно пробирки.

Методика МФ выделяют из гепаринизированной крови или костного мозга (7-10 МЕ гепарина/мл для крови и 20 МЕ гепарина/мл для костного мозга). Костный мозг разводят физиологическим раствором (рН 7,2) в соотношении 1:5; кровь, в соотношении 1:2 или 1:3. Разведенную физиологическим раствором кровь или костный мозг центрифугируют в градиенте плотности фиколл-верографин (Pharma cia Fine Chemicals, Швеция), плотность 1,077 г/мл (Хейфиц Л.Б., Абалкин В.А. Разделение форменных элементов крови человека в градиенте плотности верографин-фиколл //Лаб.дело, 1973.-10.-с.579-581) при 400g в течение 30 мин. Полученную МФ трижды отмывают в ЗФФР (физиологический раствор, забуференный с помощью фосфатно-солевого буфера) и ресуспендируют в среде RPMI-1640 (Flow Laboratories, Англия) в концентрации 106 клеток в мл. Жизнеспособность клеток, определяемая по методу окрашивания с трипановым синим (Ланг Н.Р. Стимуляция лимфоцитов //М.:Медицина, 1976.-288 с.) превышает 96%.

Литература.

1. Петров Р. В. Иммунология.— М.: Медицина, 1982;

2. Руководство по иммунологии / Под ред. О. Е. Вязова, Ш. X. Ходжаева.—М.: Медицина, 1973;

3. Лимфоциты. Выделение, фракционирование и характеристика / Под ред. Д. Натвига, П. Перлмана, X.

4. Балаян М.С., Михайлов М.И. Энциклопедический словарь – вирусные гепатиты. Изд. 2-е, перераб. и доп. М.: Амипресс. 1999. 304 с.

5. Игнатова Т.М., Апросина З.Г., Серов В.В. и др. Внепеченочные проявления хронического гепатита С // Тер. архив. 1998. Т. 70. № 2. С. 9–16.

6. Лесняк О.М. Аутоиммунные и ревматические аспекты инфицированности вирусом гепатита С // Клин. медицина. 1999. № 12. С. 14–19.

7. Николаева Л.И., Оленина Л.В., Колесанова Е.Ф. Иммунитет при разных формах гепатита С // Russian J. of immunology. 1999. Т. 4. № 2. С. 91–112.

8. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: МИР. 2000. 581 с.

9. Соринсон С.Н., Корочкина О.В., Жданов Ю.Е. и др. Латентная фаза хронического гепатита С: критерии диагностики и терапевтическая тактика // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. 1999. № 1 (5). С. 17–21.

10. Фрейдлин И.С., Кузнецова С.А. Иммунные комплексы и цитокины // Мед. иммунология. 1999. Т. 1. № 1-2. С. 27–36.

11. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. 432 с.

12. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М: Медицина, 1999. 607 с.

Федеральное агентство по здравоохранению и социальному развитию

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра иммунологии и аллергологии

Тема: Методы изучения Т- клеточного иммунитета.

Выполнила: студентка второго курса 14 уппы лечебного факультета Ионова Анастасия Витальевна.

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 557 | Нарушение авторских прав