АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Ферменты, участвующие в метаболизме ксенобиотиков.

( Различные соединения конкурируют за места связывания с цитохромом Р₄₅₀)

Установленные закономерности функционирования микросомальных монооксигеназ получены преимущественно при исследовании печеночной ткани.

Катализируемые цитохромом Р₄₅₀ реакции обычно можно описать уравнением:

RH +О₂ + NADPH + Н⁺ R-OH + H₂0 + NADP⁺

Цитохром Р₄₅₀ называют также оксигеназой смешанного действия, поскольку он не только гидроксилирует субстрат, но и восстанавливает O₂ до Н₂0. Последовательность реакций биотрансформации липофильного ксенобиотика цитохромом Р₄₅₀ представлена на схеме 1.

. Общая схема биотрансформации химических веществ микросомальными монооксигеназами печени

Вещество, подвергающееся биотрансформации (АН), на I стадии взаимодействует с окисленной формой цитохрома Р₄₅₀ (Fe³⁺) с образованием фермент-субстратного комплекса (AH-Fe³⁺). На II стадии фермент-субстратный комплекс восстанавливается (AH-Fe²⁺) электроном, поступающим из НАДФ-Н-зависимой цепи переноса от НАДФ-Н посредством НАДФ-Н-цитохром Р₄₅₀-редуктазы при возможном участии цитохрома b_5. III стадия характеризуется взаимодействием восстановленного фермент-субстратного комплекса с кислородом (АН-Fе²⁺-О₂) Присоединение кислорода осуществляется с большой скоростью. На IV стадии тройной комплекс фермент-субстрат-кислород (AH-Fe²⁺O^2-) восстанавливается вторым электроном, который, по-видимому, поступает из НАД-Н-специфической цепи переноса, включающей НАДН-цитохром b₅ редуктазу, НАДН и, возможно, цитохром b_5. V стадия характеризуется внутримолекулярными превращениями восстановленного тройного комплекса — фермент-субстрат-кислород (AH-Fe²⁺0₂^2- AH-Fe³⁺-0₂^2-) и его распадом с освобождением воды и гидроксилированного субстрата. При этом цитохром Р₄₅₀ переходит в исходную форму, готовую к взаимодействию со следующей молекулой субстрата. Лимитирующей стадией этого процесса является превращение тройного комплекса после его восстановления вторым электроном.

Первый электрон, поступающий из НАДФН-зависимой цепи, участвует в восстановлении Fe³⁺ (вторая стадия). Второй электрон поступает из НАДН·Н⁺-зависимой цепи и расходуется на образование активированного комплекса в четвертой стадии процесса гидроксилирования.

5. Сформулируйте, в чем заключается роль глутатиона в метаболизме ксенобиотиков. Ответ Наиболее широка и многообразна активность семейства глутатионтрансфераз, метаболизируюших тысячи ксенобиотиков. Большинство этих ферментов находится в цитоплазме, но некоторые из них локализованы в мембранах ЭПС и митохондрий. Основная реакция - конъюгация с восстановленным глутатионом – γ-глутамилцистеинил-глицином (G-SH) - протекает в двух вариантах: 1) присоединение к субстрату (алкены и эпоксиды) полной молекулы G-SH, 2) нуклеофильное замещение по электрофильным атомам углерода (галоген- и нитроалканы), азота (тринитроглицерин), серы (тиоцианаты и дисульфиды) или фосфора (метилпаратион).

При дальнейшем метаболизме глутатионовые конъюгаты переходят в меркаптуровые кислоты или меркаптаны. Кроме того, глутатионтрансферазы восстанавливают органические гидроперекиси в спирты и изомеризуют некоторые стероиды и простагландины.

6. В чем проявляется взаимосвязь биотрансформации ксенобиотиков и активации свободно-радикальных процессов? Ответ: В зависимости от условий реакции цитохром Р₄₅₀ может функционировать в микросомах как одно-, двух- и четырёхэлектронная оксидаза, прямо генерируя О_2ׁ^ˉ, Н₂О₂ и Н₂О в активном центре фермента. Активные формы кислорода могут образовываться в результате разобщения микросомальных моноокисгеназных реакций. При этом часть активных молекул кислорода не вступают в реакцию с субстратом, а высвобождаются из восстановленных комплексов цитохрома Р₄₅₀.

Существование в клетке оксидазных и оксигеназных систем, генерирующих активные формы кислорода позволило предположить, что кислородные радикалы играют регулирующую роль в распаде белка. В связи с этим, цитохром Р₄₅₀-зависимая монооксигеназная система также может быть вовлечена в окислительную инактивацию внутриклеточных ферментов. В тоже время цитохром Р₄₅₀, генерируя активные формы кислорода в каталитическом цикле, может действовать и как «фермент-самоубийца». Важно отметить, что ранее существующее мнение о неспецифичности окислительной модификации ферментных белков в процессе катализа в настоящее время подвергнуто сомнению. Так в работах А.И. Арчакова с соавт. (1995) показано, что инактивация цитохрома Р₄₅₀ носит селективный характер. Модифицируется лишь тот фермент, на котором образуются активные формы кислорода. Механизм разрушения цитохрома Р₄₅₀ перекисью водорода, по-видимому, включает образование гидроксильных радикалов в реакции Фентона, которые могут окислять гем и модифицировать некоторые аминокислоты вблизи каталитического центра, что позволяет эндогенным протеазам узнать модифицированный фермент и подвергнуть его гидролитическому расщеплению. В этом случае распад белка носит не случайный характер, а направлен на удаление каталитически модифицированных молекул. В отличие от неспецифической модификации белка, наблюдаемой в системах, генерирующих активные формы кислорода, окислительная самоинактивация цитохрома Р₄₅₀ в гидроксилазных реакциях может специфически регулировать распад только работающего фермента. Возможно, что модифицированные ферменты разрушаются как посредством прямой фрагментации под действием кислородных радикалов, так и вследствие протеолиза. В то же время, генерируя активные формы кислорода, цитохром Р₄₅₀ – монооксигеназная система может участвовать в окислительной инактивации других внутриклеточных ферментов, регулируя тем самым их распад в клетке. Необходимо отметить, что эта реакция очень сходна с реакцией модификации макромолекул в NADРH – оксидазной системе фагоцитов в процессе их микробицидного действия. Причём во всех типах реакций каталитически образующаяся перекись водорода играет ведущую роль.

Таким образом, возможность самоинактивации определённых форм цитохрома Р₄₅₀ со всеми вытекающими последствиями необходимо учитывать при рассмотрении таких ситуаций, когда в организм человека поступают извне чужеродные соединения, в том числе лекарственные вещества, в повышенных количествах.

Практические навыки, которыми должен овладеть студент: уметь сформулировать принципиальное различие между митохондриальным и микросомальным окислением.

Темы реферативных сообщений по теме:

Классификация свободнорадикальных форм в организме человека и их роль в жизнедеятельности

Практические навыки, которыми должен овладеть студент – знать механизмы антирадикальной защиты организма

Дата добавления: 2015-09-27 | Просмотры: 525 | Нарушение авторских прав