АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Иммунодот ИФА

Принципметода – твердефазный двустадийный ИФА. Пять аллергенов (пищевые, пыльцевые, бытовые или грибковые), а также контроли (положительный, отрицатель­ный) нанесены в виде точек на полистироловую поверхность индикаторной полоски. При первой инкубации IgE антитела сыворотки связываются с соответствующими аллергенами. Не связавшиеся компоненты отмываются. При второй инку­бации к связавшимся молекулам IgE присоединяются анти-IgE-мышиные моноклональные антитела, конъюгированные с пероксидазой. Связавшийся фермент после промывки вы­являют с помощью цветной реакции с хромогеном. Интен­сивность окраски аллергена прямо пропорциональна содер­жанию специфических IgE-антител к данному аллергену.

Оценка визуальная в соответствии с классами RAST (от 0-го до 4-го класса) по карточке интерпретации окраски.

Техника постановки анализа:

- соответствующие индикаторные полоски с пищевыми, пыльцевыми, эпидермальными, бытовыми или грибко­выми аллергенами вставить в инкубационную камеру, промаркировать;

1-я инкубация:

- внести 1,0 мл неразведенной анализируемой сыворотки в отделе-ние камеры с соответствующей полоской. Накрыть инкубационную камеру и инкубировать 2 ч при комнат­ной температуре при постоян-ном встряхивании на шейкере;

- если объем анализируемого образца меньше 1,0 мл, пробу можно развести физиологическим или промывочным рас­творами не более чем в 5 раз и инкубировать в течение ночи;

- после инкубации слить содержимое лунок, внести в ка­меры по 1,5 мл промывочного раствора и инкубировать 5 мин. при комнатной температуре при постоянном встряхивгнии. Процедуру промывки повторить еще 2 раза;

2-я инкубация:

- внести 1,0 мл раствора конъюгата в отделения камеры;

- закрыть инкубационную камеру и инкубировать 1 ч при комнатной температуре при постоянном встряхивании на шейкере;

- после инкубации провести промывку 3 раза;

проявление:

- внести по 1,0 мл проявляющего раствора в отделения ка­меры и инкубировать не менее 15 мин. при комнатной температуре при постоянном встряхивании;

- после инкубации содержимое лунок слить и внести в ка­меры по 1,5 мл дистиллированной воды.

Учет результатов:

- вынуть полоски из камеры, промокнуть фильтровальной бумагой и просушить не менее 30 мин.;

- оценка результатов визуальная, путем сравнения резуль­татов интенсивности окраски с цветовой шкалой на кар­точке интерпре-тации окраски. Приблизительное соответ­ствие класса RAST содер-жанию специфических IgE анти­тел следующее (табл.17):

Таблица 17

Тест-система позволяет определить сенсибилизацию к пищевым, пыльцевым, бытовым, эпидермальным или гриб­ковым антигенам-аллергенам.

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 770 | Нарушение авторских прав