АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Изучить реакции иммунитета при вирусных инфекциях

1. Изучить реакцию нейтрализации вируса (записать в тетрадь, оформить протокол).

Реакция нейтрализации вируса основана на способности проти­вовирусных антител погашать инфекционное действие вируса.

Источником вируса в реакции служат жидкости и экстракты инфицированных культур клеток, куриных эмбрионов, органов зараженных животных. Вируссодержащий материал освобождают от крупных, частиц, гомогенизируют и титруют для выяснения его биологической актив­ности. Источником антител служат иммунные сыворотки или парные сыворотки больных. Реакция нейтрализации широко используется в диагностике вирусных инфекций, как для обнаружения антител, так и для определения типа выделенного вируса.

Нейтрализующее действие антител можно обнаружить в опытах на животных. Для этого вируссодержащий материал смешивают с сывороткой, выдерживают смесь 1–2часа и вводят животным. Если вирус нейтрализован антителами, животное не погибает.

Реакцию нейтрализации (схема 14) можно поставить в культуре ткани. В этом случае реакцию ставят тремя способами: 1) с учетом результа­тов по цитопатогенному эффекту; 2)методом цветной пробы; 3) по гемадсорбции.

Для постановки реакции по цитопатогенному эффекту готовят разведения вируса, кратные десяти, для определения титра вируса и заражают однослойную культуру ткани. Через 5–7 дней клеточный слой разрушается, за титр вируса принимают то его наибольшее разведение, которое вызывает дегенерацию 50% клеток. После этого разведения сыворотки смешивают с ранними объемами вируссодержащего материала в определенной дозе и после часовой экспозиции эту смесь вносят в пробирки с однослойной культурой ткани. Опыт сопровождается контролями: роста вируса, жизнеспособности клеток. Все пробирки помещают в термостат при 37°С, ежедневно просматривают пробирки, через 4–6 суток учи­тывают результат. В опытных пробирках вирус будет нейтрализован антителами, и клетки культуры ткани будут нормальными, в контроле вируса произойдет дегенерация клеток. Титр сыворотки – это наибольшее разведение сыворотки, которое предотвращает дегенера­цию клеток. Тип вируса определяют по типоспецифической сыворотке, предупреждающей развитие дегенерации и культуре ткани.

2. Изучить цветную пробу (записать в тетрадь, оформить протокол)

Цветная проба основана на способности вирусов изменять метаболическую активность зараженных клеток. Это определяют по цвету индикатора, содержащегося в питательнойсреде. В незараженных клетках выражен метаболизм, выделяются кислые продукты в пи­тательную среду, изменяя рН в кислую сторону и индикатор фенолрот из красного становится желтым. При заражении клетки вирусом в ней происходят дегенеративные изменения, активность метаболизма подавляется, цвет индикатора остается красным (не меняется). Специфические сыворотки, взаимодействуя с вирусом, нейтрализуют его, клетки остаются жизнеспособными, метаболизм не подавлен, рН сдвигается в кислую сторону, среда желтеет.

Реакцию ставят на перевиваемых культурах клеток: HЕP-2, СОЦ, НЕLА и др.

Реакцию цветной пробы применяют для идентификации и дифференциации выделенных вирусов (таблица 14). Предварительно вирус титруют, опре­деляют цитопатическую дозу. Для этого готовят разведения вируссодержащего материала, кратные 10, и определенный объем каждо­го разведения смешивают с равным объемом клеток в определенной дозе. После 5-суточного инкубирования при 37°С реакцию учитывают, определяют титр вируса. За титр вируса принимают то его наибольшее разведение, при котором наблюдается подавление метаболизма клеток (цвет индикатора в среде не изменяется). В качестве антигена используют вирусный диагностикум.

Таблица 14

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 582 | Нарушение авторских прав