HLA..........и ......
7. Определить относительный риск (ОР, θ) развития аутоиммунопатологии (записать в тетрадь, оформить протокол)
Известно следующее:
HLA+ A8 и HLA - A8 выявлялись у 15 и 10 больных с аутоиммунопатологией, соответственно. HLA+ A8 и HLA - A8 были обнаружены у 187 и 809 здоровых, соответственно.
Заключение: ОР..................%
8. Решить ситуационную задачу:
У реципиента определен следующий набор антигенов гистосовместимости: HLA – A 1,3; В 7,12. В банке данных о донорских почках имеются следующие варианты:
1. HLA – A 1, 3; В 1, 12
2. HLA – A 2, 9; В 8, 15
3. HLA – A 1, 2; В 7, 12
4. HLA – A 3, 9; В 7, 13
5. HLA – A 9, 10; В 5, 7
Выберите варианты для пересадки (дать заключение, оформить протокол)
9. Изучить РБТЛ (записать в тетрадь)
Реакция бласттрансформации (РБТЛ) для определения физиологической активности (пролиферативного потенциала) клеток на неспецифические активаторы (митогены) и на специфические антигены (простейшие, грибы, бактерии, вирусы, ткани организма) играет большое значение для оценки ИДС, аутоиммунных и аллергических заболеваний, для трансплантационной иммунологии – подбора донора и реципиента и т.д. Подбирая различные митогены и оптимальные условия проведения реакции, можно в принципе дать количественную оценку Т- и В-лимфоцитов в общей популяции.
Принцип реакции бласттрансформации (РБТЛ) – активация лимфоцитов (пролиферация, трансформация) под влиянием стимулов (митогенов или антигенов) с последующей трансформацией их в бласты (большие делящиеся клетки).
В качестве активаторов РБТЛ обычно используются ФГА (фитогемагглютинин), конкавалин (Кон-А), митоген лаконоса (МЛ), бактериальные полисахариды (ЛПС), ферменты, аллергены и др. Для оптимального протекания РБТЛ целесообразно применение нескольких доз стимулятора (оптимальную, низкую и высокую) и разное время культивирования.
Техника постановки анализа:
В стерильные пенициллиновые пузырьки вносят реактивы для контрольной (1) и опытной (2) серий.
Контроль (1): 4 мл среды 199 или Игла +1 мл инактивированной сыворотки крупного рогатого скота + 0,25 мл средыг199 или Игла + 0,1 мл гепаринизированной крови пациента
Опыт (2): 4 мл среды 199 или Игла, + 1 мл инактивированной сыворотки крупного рогатого скота + 0,25 мл митогена + 0,1 мл гепаринизированной крови пациента.
Пенициллиновые пузырьки закрыть стерильными резиновыми пробками и культивировать 4 сут при t = 37°С в термостате.
Учет результатов:
1. Собрать содержимое пузырьков в пробирки и отцентрифугировать 10 мин. при 1000 об./мин.
2. Удалить супернатант. Осадок ресуспендировать в 10 мл 10%-ной уксусной кислоты и повторить центрифугирование (10 мин. при 1000 об./мин).
3. Удалить супернатант. Осадок ресуспендировать, добавить каплю метанола.
4. Приготовить мазки. Высушить на воздухе. Красить по Романовс-кому-Гимзе.
5. Просчитать процент бластов на 100-200 лимфоцитов.
Учет бластов можно вести также по изменению радиактивности культуры клеток в результате включения радиактивного изотопа в клетки, входящие в митотический цикл, используя для этого автоматический сцинтилляционный счетчик.
В контроле бласты отсутствуют, в опытном образце с митогеном бласты составляют 60-80%.
Возможен другой способ постановки анализа
Контроль: 5 мл культуральной среды + 0,1 мл гепаринизированной крови пациента + 50 мкг физиологического раствора.
Опыт: 5 мл культуральной среды, + 0,1 мл гепаринизированной
+ крови пациента + 50 мкг ФГА.
Культивировать в термостате при t = 37°С 3–4 сут. Можно использовать культуральную среду приготовленную для PTMЛ (см. предыдущее занятие).
10. Изучить значение определения HLA-B27 и HLA-B7 антигенов в патологии человека (записать в тетрадь, оформить протокол).
HLA-B27 – это антиген, который определяют для дифференциальной диагностики аутоиммунных болезней. Он выявляется у 90% больных анкилозирующим спондилитом и синдромом Рейтера, а также при некоторых других аутоиммунных патологиях.
HLA-B7 – это антиген, который также связан с риском развития анкилозирующего спондилоартрита, но его выявляют и при других, не аутоиммунных заболеваниях. HLA-B27 и HLA-B7 определяют в ПЦР в режиме Real-time.
Тест на HLA-B27 – это генетический тест. У пациентов, страдающих воспалительным артритом позвоночника и суставов (не остеоартритом), наличие HLA-B27 свидетельствует о наличии заболевания из группы серонегативных спондилоартропатий. Данная группа включает анкилозирующий спондилоартрит (АС), псориатический артрит, болезнь Рейтера. HLA-B27 присутствует у 90% людей, страдающих АС, однако ген может присутствовать и у людей, не страдающих артритом или воспалением.
Целесообразно определять антиген HLA-B27 при анкилозирующем спондилоартрите, синдроме Рейтера, ювенильном ревматоидном артрите, псориатическом артрите, хронических заболеваниях кишечника, протекающих с сакроилеитом и спондилитом, а также при увеите и реактивном артрите, вызванных Yersinia spp., Chlamydia spp., Salmonella spp., Shigella spp. Кроме того, наблюдается высокая степень корреляции между антигенами HLA-B7 и B27 и аллергическими заболеваниями, при которых гиперчувствительность проявляется как повышенное образование антител класса IgE.
5. Подведение итогов занятия – 5 мин
Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 1128 | Нарушение авторских прав
|