АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Схема проведения цветной пробы

Прочитайте:
  1. A) нарушение проведения возбуждения по правой ножке пучка Гиса
  2. II. Место и сроки проведения
  3. II. Порядок проведения предварительных осмотров
  4. III. Порядок проведения периодических осмотров
  5. VIII. Фонд оценочных средств для проведения текущего контроля успеваемости и промежуточной аттестации обучающихся
  6. Алгоритм проведения патронажа ребенка грудного возраста
  7. Аппаратурная схема производства и спецификация оборудования.
  8. Аритмии, обусловленные нарушениями проведения импульса
  9. Асептика, антисептика. Определение понятий. Способы проведения.
  10. ВАШИ ПСИХОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ ВОЗНИКАЮТ ПОТОМУ, ЧТО ВЫ С РОЖДЕНИЯ ЖИВЕТЕ В ВООБРАЖАЕМОМ ВАМИ СХЕМАТИЧНОМ ИДЕАЛЬНОМ МИРЕ.
Ингредиенты                
контроль
Сыворотка больного №1 в разведениях   1:20   1:40   1:80   1:160   1:320   1:640   с-ки   клеток
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 1:10 -
Питательная среда - - - - - - 0,25 0,25
Вирусный диагностикум одного из типов по 100 ЦПД50 на пробирку     0,25     0,25     0,25     0,25     0,25     0,25     -     -
Взвесь клеток 300-400 тыс/мл   0,25   0,25   0,25   0,25   0,25   0,25   0,25   0,25
Вазелиновое масло 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4

 

После определения титра вируса смешивают определенную его дозу с типоспецифической противовирусной сывороткой, инкубируют 1 час при комнатной температуре, и этой смесью заражают взвесь клеток культуры ткани. Опыт сопровождается контролями. Все пробир­ки инкубируют в термостате от 4 до 9дней. Изменение цвета индикатора в желтый говорит о нейтрализации вируса соответствующими антителами и позволяет определить вид вируса. Сохранение исходного цвета индикатора говорит о несоответствии вируса типу антител сыворотки.

Цветная проба для определения антител в сыворотке крови больных людей. Используются парные сыворотки для обнаружения прироста антител. Первую сыворотку берут в первые дни заболевания, вторую – на 15–20 день от начала заболевания. Сыворотки исследуют одномоментно, перед постановкой реакции сыворотки прогревают при 56–60°С в течение 30 мин для разрушения термолабильных ингибиторов.

Титрование антител в сыворотке №2 проводят аналогично.

Через 4–6 суток просматривают пробирки, учитывают результат и определяют титр сыворотки. За титр сыворотки принимают то ее наибольшее разведение, которое полностью нейтрализует вирус. Его определяют по пробирке с наибольшим разведением, окрашенным в желтый цвет. Рассчитывают прирост антител в сыворотке №2 по сравнению с сывороткой №1. Достоверным является увеличение титра антител не менее чем в 4 раза.

3. Изучить реакцию гемагглютинации (РГА) для определения титра вируса по схеме (записать в тетрадь, оформить протокол)

Перед постановкой РТГА определяют дозу вируса, которая соответствует четырехкратному увеличению титра – 4 АЕ.

Титр вируса определяют в реакции гемагглютинации. За 1 АЕ принимают максимальное разведение вируса, дающее гемагглютинацию не менее чем на два плюса. Пластину встряхивают и оставляют на 20 мин при комнатной температуре. Учитывают результат, определяют 1АЕ и рассчитывают 4 АЕ. Например: 1 АЕ = 1:32, 4 АЕ равно 1:8 (таблица 15).

4. Изучить реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) для типирования вируса (записать в тетрадь, оформить протокол)

Реакция торможения гемагглютинации основана на способности противовирусных антител нейтрализовать гемагглютинирующую активность вирусов. Реакцию ставят в развернутом ряду, используя пластины из органического стекла с лунками.

Реакцию торможения гемагглютинации ставят с типоспецифическими диагностическими противовирусными сыворотками (таблица 16). Пластину встряхивают и оставляют при комнатной температуре до оседания эритроцитов в контроле. Учитывают результат. При соответствии типа вируса антителам произойдет торможение гемагглютинации, и осадок эритроцитов будет выглядеть так же, как в контроле сыворотки – в виде «пуговки». Если вирус не соответствует антителам, произойдет гемагглютинация, и осадок эритроцитов будет выглядеть так же, как в контроле вируса – в виде «зонтика». По проведенному исследованию делают заключение о типе выделенного вируса.

С другими типоспецифическими сыворотками реакция ставится аналогично.

Таблица15

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 813 | Нарушение авторских прав

При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)