АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Схема постановки реакции агглютинации

№№ пробирок
Разведения сыворотки Компоненты	1:1000	1:2000	1:4000	1:8000	контроль антигена	контроль сыворотки
1. Физиологический раствор	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-
2. Иммунная сыворотка, развед. 1:500, титр 1:8000	1,0	1,0	1,0	1,0	В дез.р-р 1,0 мл - 1,0
3. Антиген	2 кап.	2 кап.	2 кап.	2 кап.	2 кап.	2 кап.

При отрицательной реакции микробы оседают на дно пробирки по центру, образуя на дне небольшой плотный осадок в виде точки или пятна, надосадочная жидкость остается мутной. При встряхивании осадок легко разбивается, поднимаясь вверх в виде змейки, при этом жидкость приобретает первоначальную мутность.

Степень положительной реакции агглютинации оценивается в плюсах по четырехбалльной системе:

(++++) – полная агглютинация, очень большой осадок, полное просветление жидкости, при встряхивании осадок разбивается на хлопья или зерна, жидкость остается прозрачной;

(+++) – не полная агглютинация, осадок большой, надосадочная жидкость слегка опалесцирует;

(++) – 50% агглютинация, осадок значительно меньший, надосадочная жидкость слегка мутноватая;

(+) – слабая агглютинация, осадок очень малый, надосадочная жидкость мутная;

(-) – отрицательная реакция, осадок отсутствует или небольшой
в виде пятна, при встряхивании легко поднимается в виде змейки, жидкость мутная.

Положительной считается реакция, не менее чем на два плюса.

Контроль сыворотки должен быть прозрачен, без хлопьев и зерен.

Контроль антигена должен быть мутным без хлопьев и зерен. Если наблюдается спонтанная агглютинация, реакция не учитывается.

Результат реакции рассчитайте по данным таблицы 6:

Таблица 6

Вывод: Реакция агглютинации ………………………

4. Изучить реакцию латекс-агглютинация (записать в тетрадь, оформить протокол)

Латекс-агглютинация – это реакция, в которой в качестве известного носителя используются частицы латекса. Латекс – водный раствор млечного сока каучуконосных деревьев или синтетических каучуков. Частицы латекса нагружают молекулами антигена или антитела и они приобретают способность склеиваться соответствующими анти­телами или антигенами. Если на латексе адсорбированы растворимые антигены, то эти частицы используются для обнаружения антител в исследуемой сыворотке и наоборот, если на латексе адсорбированы антитела, то частицы используют для обнаружения антигена. Чаще всего, метод используется для определения ревматоидного фактора или HBs-антигена. Ставят реакцию на стекле, смешивая нагруженный антителами латекс и исследуемый антиген, при положительной реакции уже через 5–10 минут образуются видимые невооруженным глазом агглютинаты, которые затем увеличиваются в размере.

5. Изучить реакцию коагглютинации (записать в тетрадь, оформить протокол)

В реакции коагглютинации в качестве инертного носителя используется культура золотистого стафилококка (штамм CowanI). Белок А,находящийся на поверхности оболочки этого стафилококка, способен связывать Fc-фрагмент иммуноглобулина G (Ig G1, G2, G4) оставляя свободными активные центры антитела. Эти центры взаимодействуют с соответствующими антигенами, вызывая склеивание стафи­лококков. Реакция применяется для обнаружения и типирования корпускупярных и растворимых антигенов. Для постановки реакции выпус­кают коммерческие стафилококковые реагенты (т.е. стафилококки, нагруженные антителами диагностических иммунных сывороток). К реагенту добавляют 0,01–0,1 млвыделенной культуры, перемешивают покачиванием стекла и через 10–30 минут инкубации при комнатной температуре учитывают как обычную реакцию агглютинации.

6. Изучить реакцию кольцепреципитации (зарисовать, оформить протокол)

Реакция преципитации основана на осаждении коллоидного раствора антигена антителами иммунной сыворотки в присутствии электролита

Антиген, участвующий в реакции преципитации, получил назва­ние преципитиногена. Он представляет собой вещества (белки, липиды, полисахариды, липополисахариды и др.), извлеченные из микроб­ных клеток, тканей животных и человека, исследуемого материала, находящиеся в коллоидном состоянии, в виде прозрачного или слег­ка опалесцирующего раствора. Получают преципитиноген, используя различные методы экстракции веществ из клеток и тканей: растирание с песком или стеклянным порошком с последующей фильтрацией для освобождения от обломков и целых клеток: разрушение путем встряхивания, замораживания и оттаивания, разрушение ультразвуком, химическими, биологическими воздействиями, путем электролиза. Реакцию можно поставить разными методами.

Реакцию кольцепреципитации ставят (обнаружение сибиреязвенного антигена в исследуемом материале) в узких пробирках. В опытную пробирку наливают 0,1–0,5 мл диагностической преципитирующей сыворотки, в контрольную – такое же количество нормальной сыворотки. Затем пастеровской пипеткой, держа пробирки наклонно, медленно по стенке в обе пробирки наслаивают преципитиноген, так чтобы слои жидкостей не перемешивались. Пробирки ставят горизонтально и через 1–2 минуты учитывают результат. Если исследуемый антиген соответствует антителам диагностической сыворотки, в опытной пробирке на границе жидкостей образуется белое кольцо преципитации. В контрольной пробирке такого кольца не будет.

В тетради записывают результат и делают вывод:

Реакция преципитации..................................

5. Подведение итогов занятия – 5 мин

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 850 | Нарушение авторских прав