АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Практическая работа. 1. Изучить строение антигенов по схеме(зарисовать)

1. Изучить строение антигенов по схеме (зарисовать)

2. Изучить строение антигенов бактериальной клетки (зарисовать)

3. Изучить постановку развернутой реакции агглютинации в пробирках по таблице (записать в тетрадь, оформить протокол)

Реакция агглютинации основана на способности бактерий и других клеток склеиваться антителами иммунной сыворотки в присутствии электролита с образованием зерен, комочков, хлопьев. Антиген, участвующий в реакции агглютинации, получил название агглютиногена. Он представляет собой взвесь живых или убитых микробных клеток, эритроцитов, лейкоцитов и других клеток. Антитела называются агглютининами, они содержатся в сыворотке больного или в иммунной диагностической сыворотке, образующийся комплекс антиген+антитело – агглютинат.

Внешнее проявление положительной реакции бывает различным. У безжгутиковых бактерий, имеющих соматический О-антиген, склеивание происходит непосредственно телами бактерий и агглютинат имеет вид мелких компактных зернышек или крупинок. Такая агглютинация называется О-агглютинацией, она бывает тонкозернистой и происходит медленно в течение 18–22 часов. Бактерии, имеющие жгутики, содержат жгутиковый Н-антиген и в присутствии сыворотки они склеиваются жгутиками, образуя крупные хлопья. Такая агглютинация называется Н-агглютинацией, крупнохлопчатой. Она протекает быстрее, в течение 2–4 часов.

Реакция агглютинации применяется в двух направлениях:

1) для определения неизвестной культуры микробов, выделенных от больного или из объектов внешней среды, с помощью известной диагностической сыворотки;

2) для обнаружения и определения титра антител в исследуемой сыворотке с помощью диагностикума.

Для определения неизвестной культуры микробов, выделенных от больного или из объектов внешней среды, с помощью известной диагностической сыворотки. Реакцию агглютинации ставят в сухой чистой нестерильной посуде, без следов кислот, щелочей, дезинфицирующих средств (таблица 5).

Пробирочная или развернутая реакция агглютинации основана на разведении сыворотки и определении ее титра. Из исходной сыворотки готовят основное разведение, которое может быть различным и зависит от предполагаемого титра сыворотки. Для приготовления основного разве­дения 1:50 берут 0,2 мл цельной сыворотки и смешивают с 9,8 мл физиологического раствора. Из этого разведения готовят методом переката кратные двум рабочие разведения, число рядов которого зависит от предполагаемого диагностического титра. Как правило, диагностическую сыворотку разводят до титра, который указан на этикетке. В приготовленные разведения сыворотки добавляют антиген (микроорганизм). Добавлять его можно капельно или объемно. При объемном методе к равному объему разведенной сыворотки добавляют равный объем антигена, при этомразведения сыворотки, соответственно, увеличиваются в два раза. При постановке развернутой реакции агглютинации необходимо, чтобы во всех пробирках был объем, равный 1 мл. Реакция сопровождается двумя контролями: контролем антигена и контролем сыворотки.

После смешивания антигена с антителом штатив с пробирками энергично встряхивают и помещают в термостат на 2–4 часа, а затем до суток выдерживают при комнатной температуре. Через 2–4 часа производят предварительный учет реакции, а через сут­ки окончательный. Сначала учет производят макроскопически, про­сматривая пробирки до встряхивания в проходящем свете (лучше на темном фоне). Учет начинают с контрольных пробирок. При учете об­ращают внимание на выраженность осадка (форму, величину, плот­ность) и степень просветления надосадочной жидкости. Затем про­бирку осторожно встряхивают, постукивая пальцем по донышку, и наблюдают за распределением осадка, величиной зерен осадка и степенью помутнения жидкости. Для более точной оценки результата пробирки просматривают с помощью лупы или в агглютиноскоп.

Оценка и регистрация результатов. При положительной реакции агглютинации образуется рыхлый осадок, который покрывает все дно пробирки в виде раскрытого парашюта или зонтика, обращенного куполом вниз. Осадок легко разбивается и состоит из хлопьев (Н-агглютинация), либо из плотных зерен (О-агглютинация) или из хлопь­ев и зерен (ОН-агглютинация). Жидкость над осадком просветляется в той или иной мере в зависимости от степени агглютинации.

Таблица 5

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 543 | Нарушение авторских прав