АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

На иммуноглобулины класса G (IgG)

Примечание:

4 – моноклональные анти-IgG-антитела, меченые пероксидазой хрена (конъюгат).

Принцип метода. Имму­ноферментный метод сменил иммунора-диометрический и имеет ряд преимуществ:

1) отсутствие контакта с радиоактивными веществами;

2) меньшие затраты на оборудование (высокая стоимость счетчиков);

3) устойчивость меченых соединений при хранении (не ме­нее 6 мес.);

4) возможность автоматизации процесса.

К недостаткам следует отнести:

1) канцерогенность и нестойкость некоторых ферментных субстратов (индикаторные смеси);

2) неспецифические помехи за счет ряда эндогенных фер­ментов, присутствующих в биоматериале или окружаю­щей среде.

В силу чрезвычайно мощной каталитической активно­сти фер-менты наиболее чувствительны и универсальны в ка­честве метки. В качестве ферментов-маркеров используются щелочная фосфатаза, ацетилхолинэстераза, бета-галактозидаза, пероксидаза хрена и т.д. Каталитическая активность ферментов различна и зависит от его конформационных свойств. Большинство используемых ферментов за 1 мин. при обычной температуре способны превращать в компонен­ты 10⁶ молекул субстрата в расчете на одну молекулу фер­мента. Из сказанного следует, что чувствительность реакции значительно зависит от каталитической эффективности фер­мента-маркера.

Иммунопероксидазные методы наиболее просты и эффективны при анализе срезов тканей, обнаружении анти­генов после электрофоретического разделения. При ИФА, очень важным является этап отмывки несвязавшихся реагентов. Введение в систему МкАт повышает специфичность ИФА.

Существует множество модификаций метода ИФА, но наиболее известным и используемым в практике является гетерогенный ИФА. В качестве «твердой фазы» используют полистирол, полиэтилен, сефадекс, акриламид, целлюлозу, бумажный диск и др.

Среди гетерогенных методов различают конкурент­ный, неконкурентный, «сэндвич» (англ. sandwich – бутер­брод), ингибиторный прямой и непрямой. В лабораторной иммунологии в ручном варианте наиболее популярен неконкурентный сандвич метод. В последнее время выпускаются тест-системы, где в качестве твердой фазы используются различные материалы: бумажные диски, бусинки, парамагнитные частицы и др. Обязательным условием проведения ИФА является постановка контрольных материалов и калибраторов. Контрольные материалы ставятся в каждой серии опытов.

Чувствительность ИФА высокая. Специфичность определяется чистотой антител, ис­пользуемых в системе. Автоматизация методов позволяет их стандартизиро­вать и увеличить объем исследований.

Методы широко используются в лабораторной клини­ческой иммунологии для диагностики инфекционной пато­логии, включая ВИЧ-инфекцию, дефектов гуморального и клеточного звеньев иммунной системы, в аутоиммунной патологии и в массовых эпидемиологических исследованиях.

5. Подведение итогов занятия – 5 мин

Практическое занятие 17

ТЕМА. Иммунный статус. Иммунодиагностика. Иммунодиагностические методы 1-го уровня. Иммунодиагностические методы 2-го уровня. Лаборатория клинической иммунологии мно­гопрофильного ЛПУ. Задачи. Структура. Правила работы в лаборатории. Этапы лабораторных иммунологических ис­следований. Принципы лабораторных методов. Контроль качества лабораторных иммунологических методов исследования

Цель занятия. Ознакомить студентов с лабораторией клинической иммунологии ЛПУ, правилами работы в лаборатории. Дать представление об этапах лабораторных иммунологических ис­следований. Ознакомить с контролем качества лабораторных иммунологических методов исследования

Дата добавления: 2015-10-11 | Просмотры: 432 | Нарушение авторских прав