АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphtheriae

Возбудитель дифтерии относится к семейству Corynеbacteriaceae, роду – Corynebacterium.

Морфология. Прямая или слегка изогнутая полиморфная палочка, размеры варьируют (0,3–0,8 мкм в ширину, 1,8–8,0 мкм в длину). Наряду с длинными изогнутыми формами встречаются короткие с колбообразными вздутиями на концах клетки, что придает им сходство с булавой. Во вздутиях часто находятся зерна волютина (тельца Бабеша-Эрнста). Палочки в культуре могут располагаться попарно, под углом в виде цифр V, Y, V, L, что связано с разламывающим механизмом деления. Наличие поверхностных липидов способствует спонтанной агглютинации бактерий. Неподвижны, не имеют жгутиков, капсул и спор не образуют. Имеют микрокапсулу с входящим в её состав корд-фактором. Клеточная стенка многослойная, содержит большое количество липидов, в том числе миколовых кислот. Кислотоустойчивостью не обладает. Нуклеоид заполнен тонкими осмиефильными фибриллами.

Тинкториальные свойства. Грамположительная палочка. Хорошо окрашивается основными анилиновыми красителями. При использовании окраски по методу Нейссера зерна волютина приобретают темно-синий цвет на желто-коричневом фоне клетки. Выявляются также при окраске препаратов метиленовым синим по Леффлеру. При окраске по Граму зерна волютина не обнаруживаются. При люминесцентной микроскопии они окрашиваются корифосфином в оранжево-красный цвет, тела бактерий приобретают желто-зеленый оттенок.

Культуральные свойства. Дифтерийные микробы являются факультативными анаэробами и хорошо размножаются на питательных средах при температуре 33–37°С и рН 7,6–8,0.Гетеротрофы. На простых питательных средах не растут, так как не продуцирую эндопротеазы, способные расщеплять нативные белки до аминокислот. Лучшими являются среды, содержащие кровь или сыворотку животных, которая содержит факторы роста (правовращающая молочная кислота, никотиновая и пимелиновая кислоты. К стимуляторам роста относят и олеиновую кислоту. Наиболее распространены среды Ру (свернутая кровяная бычья сыворотка), Леффлера (свернутая лошадиная сыворотка с добавлением сахарного бульона), Клауберга (кровяной теллуритовый агар), хинозольная среда Бучина, цистин-теллурит-сывороточная среда Тинсдаля-Садыковой.

На элективных средах возбудитель опережает в росте другие микроорганизмы и через 8-14 ч и вырастает в виде желтовато-кремовых точечных колоний, которые не сливаясь имеют вид шагреневой кожи.На теллуритовых средах микроб дает пышный рост в виде темно-серых или черных колоний в результате восстановление теллурита до металлического теллура.

На среде Бучина через 24-48 ч на месте роста колоний синего цвета среда приобретает фиолетовый оттенок. На среде Тинсдаля-Садыковой коринебактерии образуют типичные серые или темно-коричневые колонии.

На бульоне рост проявляется в виде равномерного помутнения, иногда образуется нежная пленка, которая постепенно утолщается, крошится и хлопьями оседает на дно.

Ферментативные свойства. Коринебактерии обладают высокой биохимической активностью. Ферментируют глюкозу и мальтозу с образованием кислоты, не гидролизуют сахарозу, лактозу, маннит, восстанавливают нитраты в нитриты, не продуцируют уреазу и не образуют индол. C. diphtheriae продуцируют ферменты каталазу, сукцинатдегидрогеназу и цистиназу, расщепляющую цистин до сероводорода, который реагируя с уксуснокислым свинцом, вызывает почернение столбика сывороточного агара, в результате образования сернистого свинца (положительная проба Пизу). По этим признакам C.diphtheriae отличается от коринебактерий, которые часто встречаются на слизистой оболочке глаза (C.xerosis), носоглотки (С.pseudodiphtheriticum) и других дифтероидов.

На основании культуральных и ферментативных свойств различают 4 биовара диф­терийных микробов: gravis (тяжелый), mitis (средний), intermedius (промежуточный) и belfanti.

Бактерии биовара gravis наиболее вирулентны, на плотных средах они образуют курупные серовато-черные колонии неправильных очертаний (R-форма колоний), на бульоне дают зернистый осадок и пленку. Биохимически активны. Ферментируют глюкозу, мальтозу, крахмал и гликоген.

Биовар mitis образует выпуклые, черные, гладкие, полупрозрачные колонии (S-формы), окруженные зоной гемолиза. На жидкой среде дают равномерное помутнение и порошкообразный осадок. Разлагают только глюкозу и мальтозу.

Промежуточный биовар обладает свойствами того и другого.

Бактерии биовара belfanti имеют общие свойства с биоваром mitis, но в отличие от него не восстанавливают нитраты в нитриты.

Токсинообразование. Основной фактор патогенности – дифтерийный гистотоксин. Дифтерийный токсин в бактериальной клетке находится в форме протоксина (предшественника токсина) и представляет собой единую полипептидную цепь, включающую А- и В-фрагменты, которые в интактной молекуле соединены дисульфидными мостиками. После контакта протоксина с рецепторами чувствительной клетки под действием бактериальных протеаз либо ферментов макроорганизма происходит расхождение фрагментов А и В. Фрагмент В осуществляет специфическое взаимодействие со специфическими ганглиозидными рецепторами клетки и формирует транспортный канал для фрагмента А, который обеспечивает токсичность. Попав в цитозоль чувствительной клетки он приобретает ферментативную активность, обладая свойствами АДФ-рибозил-трансферазы, способной переносить АДФ-рибозу на фактор элонгации EF-2. Рибозилирование фактора элонгации ведет к нарушению синтеза белка на стадии построения пептидных цепей на рибосомах эукариотической клетки и её гибели в результате некроза.

Прокариотические клетки нечувствительны к дифтерийному токсину, так как используют в синтезе белка другой фактор элонгации (EF-6).

Дифтерийный гистотоксин может поражать и другие клетки, особенно в органах и тканях с интенсивным кровоснабжением (сердечно-сосудистая система, миокард, периферическая и ЦНС, почки и надпочечники).

Токсигенность дифтерийной палочки связана с лизогеннстью. Генетические детерминанты токсигенности (гены tох+) локализованы в геноме профага, интегрированного с нуклеоидом коринебактерии дифтерии. Нетоксигенные штаммы не вызывают заболевания, хотя могут длительно персистировать в респираторном тракте человека.

Инвазивные свойства возбудителя связаны с гиалуронидазой, нейраминидазой и протеазой.

Патогенность дифтерийного микроорганизма также зависит от наличия у него токсического гликолипида, находящегося в клеточной стенке и оказывающего разрушающее действие на клетки ткани в месте размножения возбудителя.

Антигенная структура. Дифтерийные бактерии гетерогенны по антигенной структуре, что обусловлено поверхностными термолабильными белковыми К-антигенами, а также термостабильными липидными и полисахаридными фракциями О-антигенов, расположенных в клеточной стенке. Установлено всего 58 сероваров. Наиболее сложен в антигенном отношении биовар mitis – 40 сероваров.

Патогенность для животных. Дифтерия относится к антропонозным заболеваниям. В естественных условиях дифтерией болеет только человек.

Патогенез. Источником возбудителя являются больные люди и бактерионосители. Основной механизм заражения – аспирационный, возможны контактный и алиментарный механизмы. Микроб передается воздушно-капельным путем (разговор, кашель, чихание), иногда через предметы обихода и пищевые продукты, инфицированные бактериями дифтерии (воздушно-пылевой и контактно-бытовой пути передачи). Попадание возбудителя в молоко может привести к его размножению и обусловливать пищевой путь передачи инфекции. При дифтерии кожи и ран имеет место путь передачи – прямой контакт.

Входными воротами инфекции, чаще всего, служат слизистые оболочки миндалин, носа, глотки, гортани, конъюнктивы глаза и, редко, поврежденная кожа, раневая и ожоговая поверхности, слизистые оболочки глаз и половых органов. Наиболее часто встречается дифтерия ротоглотки (90-95%). Начальной стадией инфекционного процесса является адгезия возбудителя в месте входных ворот инфекции за счет поверхностных ультраструктур бактерий (корд-фактор, миколовые кислоты) и их колонизация.

Возбудитель дифтерии, размножаясь в месте внедрения, продуцирует экзотоксин, который оказывает как местное, так и общее действие. На месте входных ворот (ротоглотка, надгортанник, голосовые связки – слизистые оболочки с многослойным плоским эпителием) возникает воспалительная реак­ция, отек слизистых оболочек с образованием некроза, который способствует размножению бактерий. В толще слизистой токсин также вызывает воспалительный процесс, сопровождающийся расширением сосудов и их повышенной проницаемостью. На слизистой оболочке появляется экссудат, богатый фибриногеном, который свертывается под действием тромбокиназы, освобождающейся при некрозе эпителия. В результате образуется фибринозная пленка сероватого или желтоватого оттенка – характерный признак дифтерии. Фибринозная пленка плотно спаяна с подлежащей тканью и при попытке снять её тампоном слизистая оболочка сильно кровоточит. Патологический процесс может распространяться и поражать слизистую оболочку носа и среднего уха.

При крупозном воспалении в дыхательных путях (гортань, трахея, бронхи – слизистые оболочки покрыты однослойным цилиндрическим эпителием) фибринозная пленка располагается поверхностно и легко отделяется от подлежаших тканей, что ведет к развитию асфиксии.

Токсин по лимфатическим путям проникает в ткани, вызывает отек слизистых оболочек и регионарных лимфоузлов. Посту­пая в кровь, он воздействует на нервную, симпато-адреналовую и сердечно-сосудистую системы. В результате этого возникают гиподинамические нарушения, миокардит, невриты, некроз надпочечников, токсический нефроз и т. д.

Саногенез. После перенесенного заболевания формируется длительный, прочный антитоксический иммунитет. Особое значение имеют антитела к фрагменту В, предупреждая прикрепление дифтерийного токсина к рецепторам клетки. В тоже время гуморальный антитоксический иммунитет не препятствует формированию бактерионосительства Антибактериальный иммунитет является клеточно-опосредованным, серовароспецифичным и малоэффективным.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат слизь и пленки из очага воспаления.

Микроскопический метод. Из исследуемого материала делают мазки и окрашивают их метиленовым синим Леффлера или краской Нейссера. Выявляют наличие палочек дифтерии по морфологическим признакам и наличию телец Бабеша-Эрнста, что является дифференциальным признаком для коринебактерий дифтерии. Их можно определить и в люминесцентном микроскопе, окрашивая препарат раствором корифосфина. В связи с полиморфизмом возбудителя как самостоятельный диагностический метод не применяется.

Бактериологический метод. Выделение чистой культуры начи­нают с посева исследуемого материала на элективные питательные среды для коринебактерий: среду с теллуритом (Клауберга II, Германа), хинозольную среду Бучина, 5% кровяной агар. После появления колоний, часть одной из них высевают на среду для определения токсигенности, а часть – в столбик среды для определения цистиназы. Для идентификации возбудителя исследуют морфологические, культуральные и биохимические свойства культуры и ставят пробу на токсигенность методом преципитации в агаре. Используют метод фаготипирования.

Для ускоренного обнаружения токсина применяют РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом, РИА и ИФА. Из молекулярно-генетических методов диагностики используют ПЦР.

Серологический, биологический и аллергологический методы не применяют.

Профилактика. В профилактике дифтерии главная роль отводится иммунизации. Используют дифтерийный анатоксин, входящий в АКДС-вакцину (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-стобнячная вакцина), АДС (адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин), АДС-М препарат (адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин с уменьшенным содержанием антигенов), АД-М (адсорбированный дифтерийный анатоксин с уменьшенным содержанием антигена).

В России также зарегистрированы следующие вакцины:

· Тетракок,предназначенная для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка и полиомиелита (Пастер-Мерье, Франция);

· Д.Т.Вакс,содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины. Применяется у детей до 6 лет;

· ДТ-адюльт,включает дифтерийный и столбнячный анатоксины (Пастер-Мерье, Франция). Используется у подростков и взрослых.

В настоящее время в нашей стране разработаны и предложены новые вакцины для одновременной иммунизации против дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В: АКДС-В-гепатитная вакцина («Бубо-Кок») и АДС-М-В-гепатитная вакцина («Бубо-М»), которая содержит поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg), полученный с помощью рекомбинатной технологии из культуры дрожжевых клеток.

Лечение. Проводят раннее лечение специфической противодифтерийной лошадиной сывороткой. Введение сыворотки после 3-го дня болезни считается поздним, т.к. токсин уже связан с тканями. Разработан противодифтерийный иммуноглобулин человека для внутривенного применения. Назначают антибиотики, оказывающие влияние на дифтерийные бактерии.

Дата добавления: 2015-05-19 | Просмотры: 2310 | Нарушение авторских прав