АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Узяття і пересилка матеріалу для дослідження хвороб риб

Мета і умови проведення іанятгя: Навчитись відбирати патматеріал для проведення лабораторних досліджень на вірусні, бактеріальні, грибкові та паразитарні хвороби. Освоїти методи відбору матеріалу для хіміко-токенкологічного, біохімічного досліджень га при підозрі на отруєння риб. Заняття проводиться в навчальній аудиторії. Студенти керуються методичним посібником.

Завдання: Відібрати патматеріал для проведення лабораторних досліджень на вірусні, бактеріальні, грибкові та паразитарні хвороби. Освоїти методи відбору матеріалу для хіміко-токсикологічного. біохімічного досліджень га при підозрі на отруєння риб. Лаги відповіді на контрольні запитання.

Хворих або підозрілих н захворюванні інфекційними і інвазійними хворобами риб доставляють в лабораторію в живому вигляді. Для дослідження відбирають 15 20 риб з

явно вираженими клінічними ознаками хвороби. Риб перевозять в чистих молочних бідонах, ваннах або інших ємкостях, призначених для перевезення живої риби, заповнених на 3/4 об’єму водою з того ж водоймища, звідки узята риба, або з артезіанської свердловини. Риба, доставлена в лабораторію в папері, марлі і ін. пакувальних матеріалах, для дослідження непридатна. Влітку при тривалому транспортуванні воду з рибою поступово охолоджують до температури 12 - 15°С. додаючи шматочки льоду. Щоб не викликати температурного шоку і простудних явищ, не можна пересаджувати рибу у воду, що мас температуру нижче, ніж у водоймищі (на 7°С і більш). За відсутності можливості доставити живу рибу, у крупних риб беруть шматочки уражених органів і тканин, поміщають їх в стерильний скляний посуд, заливають стерильними 40%-ньім водним розчином гліцерину, закривають пробкою, покривають парафіном і направляють з посильним в лабораторію. Рідкий патологічний матеріал (кров, ексудат і ін.) доставляють в лабораторію в запаяних стерильних пастерівських піпетках. Влітку патологічний матеріал придатний для бактеріодої ічного дослідження протягом 2 годин після його узяття. Взимку патологічний матеріал можна посилати замороженим.

Л.ІИ ВІРУСО.ІОІ ІЧНОЮ ДОЄ.ІІ Г/КеїПІИ жнвнх риб поміщають в подвійний поліетиленовий пакет, заповнений водою на 1/3 об'єму. У зовнішній пакет для охолоджування води кладуть лід. Пакет поміщають в ящик, відправляють з посильним в лабораторію. Мертва риба відправляється тільки в тому випадку, якщо вона загинула після вилов> перед відправкою в лабораторію. Таку рибу кладуть в поліетиленовий пакет, який поміщають в термос або пакет з льодом. При направленні риби для дослідження на віруеоносійство беруть, з дотриманням правил асептики, внутрішні органи (можна об'єднувати органи від п'ят риб в одну пробу) і поміщають в стерильний флакон, який щільно закривають гумовою пробкою. Флакон поміщають в гермос або поліетиленовий пакет з льодом. У тих випадках, коли неможливо направити матеріал негайно, його можна зберігати в холодильнику при температурі не вище +4°С не більше доби. Патологічний матеріал від хворих риб або підозрюваних в захворюванні вірусної етіології можна консервувати 50%-пьім фосфатно-буферним розчином г ліцерину рП 7.2—7.4.

а) Вірусна геморагічна септицемія (ВГС). У плідників і ремонтної форелі відсмоктують з черевної порожнини шприцом з голкою перитонеальну рідину, зливають її в стерильну пробірку з гумовою пробкою і направляюіь у ветеринарну лабораторію.

При підозрі на вірусну геморагічну септицемію патологічний матеріал 50%-ньім фосфатно-буферним розчином не консервують, а відправляють в пакетах з льодом.

б) Інфекційний некроз гемопоетичиої гканини (ІНГТ). У лабораторію посилають від риб маткового поголів'я внутрішні органи, а в період нересту оваріальну рідину разом з ікрою, які помішають в стерильні флакони або пробірки т гумовими пробками і відправляють в термосі або поліетиленовому пакеті з льодом.

в) Інфекційний некроз підшлункової залози (Il II ГЗ). Від плідників і ремонтної риби беруть перитонеальну рідину, яку набирають з черевної порожнини шприцом з голкою, зливають її в стерильну пробірку з гумовою пробкою. Для дослідження в період між сезонами нересту від плідників беруть фекалії, проби яких перевозять в термосі з льодом в стерильних пробірках або флаконах, закритих гумовими пробками.

Матеріал для паїо.іоі ічноїо дослідження беруть від хворих енулих риб. Дрібних риб (мальки і цьогорічки) після розтину черевної порожнини фіксують цілком, а від великих беруть органи або шматочки органів розміром 2 х 3 см і завтовшки 0.5 1.0 см.

Шматочки з уражених органів і тканин вирізують так, щоб були захоплені нормальні і уражені ділянки. Незалежно від ступеня ураження беруть шматочки з різних органів: шкіри з належною мускулатурою, зябер, печінки, нирок, селезінки, серця, кишечника, плавального міхура, головного мозку. Кишечник перед фіксацією обережно розкривають або роблять на ньому декілька надрізів, щоб фіксуюча рідина проникла в його порожнину.

Головний мозок обережно витягують цілком після розтину черепної коробки. Що підлягає дослідженню матеріал поміщають в широкогорлу скляну банку і фіксують звичайним способом. Дія гістохімічних досліджень патологічний матеріал фіксують так: його негайно поміщають у фіксуючу рідину, об'єм якої повинен в 10 разів перевищувати об’єм узятого матеріалу. Як фіксуюча рідина краще всього використовувати 10%-ний водний розчин формаліну або %%-ньш етиловий спирт. ГІри застосуванні спирту товщина шматочків тканини не повинна перевищувати 0.5 см. Фіксуючу рідину у всіх випадках через добу необхідно замінити свіжою. Патологічний матеріал фіксують в скляному посуді. Головний, спинний мозок фіксують в 10%-ному нейтральному формаліні. Формалін нейтралізують збільшенням у формалін сухої крейди або вуглекислого магнію до 1/10—1/20 його об'єму. Дія фіксації шматочків мозку можна використовувати також 96%-ний етиловий спирт, рідину Карнуа або суміш Буена. Кров для дослідження беруть з хвостової артерії або з серця. Луску на місці узяття крові злущують скальпелем, шкіру витирають від слизу і дезинфікують 70%-ньім спиртом. Кров насмоктують в пастерівську піпетку, потім переносять на годинникове скло і швидко відбирають кількість, необхідну для гематологічних досліджень (підрахунку кількості формених елементів, визначення гемоглобіну, приготу вання мазків і так далі).

Д ій біохімічних.іос.іі.г/кснь цільну кров оберігають від згортання, додаючи до неї лимоннокислий або щавлевокислий натрій (на І мл 2 міліграми), або 1—2%-пьій розчин гепарину (на 1 мл від 0.01 до 0.02 міліграма) і доставляють в лабораторію н герметично закритих скляних судинах (пробірках), з етикеткою. Сироватку крові для біохімічних досліджень отримують так: узяту кров витримують близько години при 20 -30°С для згортання. Потім згусток крові відокремлюють від стінок пробірки сталевою спицею (дротом), яку дезинфікують розчином карболової кислоти або обпалюють на полумї після кожної проби, після чого пробірки витримують при 4 10°С. Через 18 24 години

сироватку, що відстоялася, в кількості 2 3 мл зливають в сухі стерильні пробірки (краще в пробірку Флоринського), які маркують гак само, як пробірки з кров'ю, і направляють в лабораторію в свіжому або консервованому вигляді. Пробірки з сироватками закривають стерильними гумовими пробками і встановлюють для пересилки у вертикальному положенні (пробірки Флоринського — в однойменних штативах).

При підозрі на іниашіні хвороб и

у крупних риб витягують уражені паразитами органи і тканини (зябра, кишечник, печінка, і ін.) і посилають для дослідження законсервованими в банках, дрібних риб цілком. Цілих риб або шматочки органів і тканин консервують в 70“ -йому етиловому спирті або 4%-ному розчині формаліну. Виявлених мри клінічному огляді і розтині паразитології риб паразитичних організмів поміщають в пробірки або флакони з консервуючою рідиною. Паразитичних найпростіших наносять на покривне або наочне скло і. не даючи мазку підсохнути, опускають в рідину Шаудіиа (50 мл насиченого розчину сулеми і 25 мл абсолютного спирту) на 20 хвилин. Маленькі шматочки уражених паразитами тканин і органів фіксують вказаною сумішшю протягом 30—120 хвилин. Потім скло промивають кілька разів водою і 70“ -ним спиртом і зберігають в ньому- до дослідження. Вологі мазки, шматочки органів і тканин риб з паразитами можна фіксувати також в рідині Ьуена. Фіксація мазків 1—20 хвилин, шматочків 1 12 годин. Гельмінтів,

перш ніж консервувати, ретельно промивають у фізіологічному розчині. Моногепегичиих сосальщиков (дактилогирус. гиродакгилус і ін.) консервують в 4%-ному розчині формаліну. Трематод і дрібних цестод поміщають на наочне скло, накривають покривним склом або шматком наочного скла (для ніжного пресування), заливають 70° -ним спиртом і залишають на декілька годинників. Після цього гельмінтів перекладають за допомогою пензлика в пробірку (флакон) із спиртом. Одночасно частин) трематод (цестод), що убиваються у фізіологічному розчині, не піддаючи пресуванню (для збереження природної форми), помішають в пробірку * 70° -ним спиртом. Нематод і личинкові стадії цестод консервують в рідині Барбагалло. Крупних стрічкових гельмінтів після убивання у

фізіологічному розчині помішають в 70° -ний спирт. ІІри консервації скребней в 70° - ному спирті добиваються витискування хоботка з піхви шляхом слабкого пресування передніх кінців за допомогою покривних скелець. Паразитичних рачків консервують в 3%-ному розчині формаліну і відразу ж переносять для зберігання в 70° -ний спирт. П'явок фіксують в 1-2%-ному розчині формаліну.

При пілоті на оіпугнни рнГ> відбирають проби води з водоймища безпосередньо на місці загибелі риби, стічні води промислових підприємств і сільськогосподарських об'єктів, що знаходяться поблизу водозбірної площі даного водоймища. Для гідрохімічною і хіміко-токсикодог ічних досліджень проби води з водоймищ беруть в кількості 2 3 л кожна, батометром з поверхневих (на глибині 30 - 50 см від дзеркала

води) і глибинних шарів (не менше 10 - 15 см від дна), не допускаючи взмучувания грунту, так. щоб проба відповідала всій масі досліджуваної води. З ополонки пробу води беруть на глибині 10 15 см від нижньої поверхні льоду. При відборі проб необхідно

виключити елементи випадковості (тимчасова мутність води, поверхневий шар води з випадковим забрудненням). У проточному водоймищі проби беруть на бистрині, перепалах, водозборах і водоспусках. З великих водоймищ проби беруть в декількох місцях з урахуванням гідробіологічних особливостей кожної ділянки (заросли, заболочені ділянки, плеса і гак далі), в однотипних за гідробіологічними умовами водоймищах - в одному двох місцях, па відстані 3 - 4 м від берега. Поблизу сільськогосподарських об'єктів, промислових підприємств і місць скидання комунально-побутових стічних вод. проби води беруться на умовно чистій ділянці вище за джерело забруднення; у місці надходження стічних вод і на різній відстані в декількох крапках нижче за місце випуску стоків. На промисловому підприємстві відбирають середньодобові проби (2 3 л) води

загального випуску. Воду для анатізу відбирають в чисто вимиті (без мила) склянки. Перед наповненням склянку промивають 2-3 рази досліджуваною водою. ІІри транспортуванні проб зимою їх потрібно утеплити. Якщо доставка в лабораторію в геплий час займе понад добу, узяті проби консервують. Для цього в пробу, призначену для визначення зважених речовин, нітриту, нітратів, фосфатів на кожен літр води додають 2 мл хлороформу і добре збовтують. У порцію, призначену для визначення аміаку, окисдюваиості. хлоридів на 1 л долають 2 мл 25%-ной сірчаної кислоти. Третю частину проби для хімічного аналізу на токсичні компоненти стічних вод не консервують.

Для хіміко-кженко.нн ічних досліджені, в лабораторію доставляють живих або недавно загиблих риб. не менше 5 екземплярів кожного виду. Одночасно направляють риб тою ж вигляду з благополучного водоймища дія контрольних досліджень. Якщо доставити живих або недавно загиблих риб неможливо, а також в теплу пору року, риб охолоджують па льоду, проморожують або консервують спиртом-ректифікатом. Інші речовини для консервації використовувати не можна. Разом з пробами висилають 50—100 мл консервам та.

Грунт дія досліджень беруть в кількості 2 кг з поверхні дна водоймища лночерпальииком Екмана або Кіргіічнікова. Проби відбирають вище передбачуваного джерела забруднення, в місці надходження стічних вод і на різній відстані в декількох місцях нижче за місце випуску стоків — на течії і в застійних зонах (ямах, бочагах, низинах). Грунт висушують на повітрі, розтирають в ступці, просівають через дрібне сито і упаковують в широкогорлі банки або поліетиленові мішечки по 50 і кожен.

Планктон беруть планктонною сіткою.

Дія цього 50—100 л води пропускають через сі гку і збирають планктон. Матеріал для дослідження на відправлення збирають комісійно за участю ветлікара-іхтіопатолога, фахівця органів рибоохорони водного господарства, санітарно-епідеміологічної станції і представника місцевої адміністрації. Весь матеріал (проби води, грунту, планктону і риб) упаковують у водонепроникну гару, опечатують і разом з актом комісії направляють в лабораторію з посильним.

Контрольні запитання

24. Який матеріал потрібно відбирати при підозрі на вірусні хвороби риб?

25. Який матеріал потрібно відбирати для патологічного дослідження риб?

26. Який матеріал потрібно відбирати для біохімічних досліджень при хворобах риб?

27. Який матеріал потрібно відбирати для лабораторних досліджень при підозрі на отруєння риб?

28. Який матеріал потрібно відбирати для хіміко-гоксикологічннх досліджень при хворобах риб?

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 610 | Нарушение авторских прав