АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

ТЕМА №6 Методи вакцинації у рибнішіні

Мета і умови проведення заняття: Вивчити методи вакцинації риб. Заняття проводиться в навчальній аудиторії. Студенти керуються методичним посібником.

Завдання: Керуючись посібником освоїти основні методи вакцинації риб. Визначити переваги і недоліки того чи іншого методу імунізації. Дати відповіді на контрольні запитання.

У промисловому рибництві найчастіше для терапії і профілактики хвороб риб використовуються хіміопрепарати або антибіотики. Проте обробка хімічними речовинами не завжди безпечна для риб. Що стосується антибіотиків, то. хоча вони і не токсичні, у мікроорганізмів може виробитися толерантність до антибіотиків і лікування стаєнеефективним. Альтернативним (але не єдиним) способом с попередження хвороб за допомогою вакцинації риб.

Традиційно при розробці вакцин використовують інактивовані цілі клітки або живі аутенуйовані віруси. Такі вакцини застосовують при фурункульозі, вібріозі і VUS. Проте недоліком обох методів г потреба у великій кількості мікроорганізмів для виділення антигену, достатнього для використання у вакцині. Іому проводяться дослідження по вдосконаленню способів розробки нових вакцин. Висловлено припущення, що при розробці вакцинних препаратів перспективне використання білкових, полісахаридиих і/або пептидних фрагментів, відповідних специфічним антигенним ферментам збудника інфекції. Це припущення підтверджене експериментально: імунізація молодняку веселкової форелі і лосося за допомогою сирого бактерійного лізату, отриманого за рахунок експресії рекомбінантного гена, забезпечувала імунітет проти зараження вірусом гемопоетичного некрозу.

У інших дослідах показано, що невеликі синтетичні пептиди, відповідні певним зонам білкових антигенів, індукують утворення антитіл, які здатні пов'язувати їх з нативним білком. Але. щоб викликати ефективну імунну реакцію, синтетичні пептиди повинні приєднуватися до макромолекулярних переносників, таких як білки (Альбумін бичачої сироватки), лінійні або розгалужені полісахариди (декстран. фікол) або синтетичні полімери (полілізин). Синтетичні пептиди можуть також бути зв'язані біфункціональними молекулами (глутаральдегід). що збільшить їх імуногенність. Способами використання синтетичних пептидів дія отримання імунної реакції також можуть бути їх адсорбція на деревне вугілля, застосування силікатних кульок і інтактних клітин, таких як еритроцити, або інкапсуляція за допомогою лізосом.

Імунологічні препарати вводяїь в організм риб наступними способами:

1) парентеральне введення (безпосередньо у внутрішнє середовище організму) — внутрішньочеревно, внутрішньом'язовнй. підшкірно;

50. введення через слизисті покриви: ентерально (через травний факт), інфільтраційний (через зовнішні слизисті покриви) — просте всмоктування, індуковане всмоктування гіперосмотична інфільтрація, вакуум-інфільтрація (Віхман. 1984).

Метод вакцинації має істотне значення в імунопрофілактиці. Одним і найбільш ефективних і часто використовуваних способів введення вакцин є ін'єкція інактивоваинх збудників у водно-жировій емульсії. Але цей метод вимагає великих тимчасових витрат і він трудомісткий, що стримує його широке застосування. Більш того, перед ін'єкцією рибу слід анестезувати, а отже, додатково підтавати стресу. До того ж риба повинна бути достатньо великою.

При простому або гіперосмотичному всмоктуванні рибу занурюють в розбавлений розчин антигену, який потім адсорбується. Дослідження, здійснені ще в середині 70-х років, показати, що риба, занурена в розчин Альбуміну бичачої сироватки (BSA). що містить сечовину або NaCI. адсорбує BSA в потік крові первинно через систему бічної лінії і повторно через зябра Цей спосіб вакцинації менше піддає стресу рибу, ніж ін'єкції, і його можна застосовувати в ширших масштабах.

Вважають, що найбільш нешкідливим методом вакцинації є оральне введення. Цей спосіб не піддає стресу рибу. Його можна використовувати дія риб будь-якого віку. Не вимагається додаткових тимчасових і трудових витрат, оскільки антиген (зазвичай інактивовані збудники) змішується з кормом. Недолік цього способу — не такий міцний імунітет в порівнянні з імунітетом, що індукується ін’єкціями, і потреба у великій кількості антигену. Остання, мабуть, пов'язана з розкладанням біоактивного матеріалу' в травній системі риб, і її можна мінімізувати шляхом захисту антигену, застосувавши інкапсуляцію вакцини.

Інший шлях посилення імунітету після оральної вакцинації — збільшення експозиції антигену. Цього можна досягти за умови контрольованого і безперервного введення антигену з укладеної в полімерний матеріал вакцини. При створенні подібноготипу вакцин необхідно брати до уваги анатомічні і фізіологічні особливості травної системи риб і перш за все величину pH. Окрім pH важливе значення при визначенні абсорбції медикаментів або молекул в шлунково-кишковому тракті мають проникність кишечника, час проходження через шлунок і кишечник, метаболічна стабільність і наявність ферментів, таких як хітиназа. Фізичні параметри медикаментів (розчинність, швидкість розчинення, молекулярний розмір, хімічна стабільність) і спосіб введення також впливають на абсорбцію в струм крові. Змінюючи ці параметри, можна розробити ефективну вакцину.

Ефективне застосування імунопрофілактики в рибництві визначається безліччю чинників. Активність імунологічних процесів у риб. як правило, буває нижчою при низьких температурах. Проведена в них умовах вакцинація може дати значно занижені результати. Для лососевих риб гранично низькою температурою є 6°С, для коропа І2°С. На активність імунологічних процесів у риб робить також вплив сезон року. Встановлено, що у веселкової форелі, що міститься при температурі 18°С. імунізація дат гірші результати взимку, чим навесні.

Ефективність вакцинації зменшується у при стресі риб. Наприклад, киснева недостатність, транспортування, велика щільність посадки риб проявляють імуноподавляючу дію. Тому у таких риб вакцинація може не дати позитивного результату. У цих випадках рекомендують застосовувати вакцини тільки через 10 днів після виникнення стресу.

Нестача в кормі риб вітамінів, особливо В і Е, робить негативний вплив на реакцію їх імунної системи, тому перед вакцинацією риби повинні харчуватися раціонально.

Забруднення водного середовища різними токсичними речовинами також позначається несприятливо. Імуноподавляючу дію чинять деякі лікарські засоби, наприклад антибіотики і сульфамідні препарати. Гому безпосередньо відразу після лікування ними не слід застосовувати вакцини.

На результати вакцинації впливають доза і розчинність антигену. Останній чинник маг істотне значення, оскільки розчинні антигени можуть вводитися з адьювантом (стимулятором), що підсилює імуногенну дію.

Вакцини широко використовуються в більшості європейських, скандинавських і багатьох інших країнах світу. Промислове застосування мають вакцини проти основних бактерійних хвороб, в основному лососевих риб: вібріозу, єрсініозу і фурункульозу. Наприклад, у Великобританії близько 80% форелевих ферм при вібріозі використовують вакцини безпосередньо або побічно, набуваючи вакцинованого посадочного матеріалу. Вартість вакцин чимала, азе це виправдано, оскільки втрати серед лососевих риб. що викликаються цими захворюваннями, значні. Гак. в Японії від вібріозу гине до 40% форелі.

Вакцини проти вібріозу найчастіше містять інактивоваиі бактерії двох видів: Vibrio anguillarum і V.ordalii. У Норвегії розроблена вакцина проти холодноводного вібріозу, що викликається V. salmonicida (хвороба Хитра), який в 1977—1988 pp. завдав рибництву країни збитку, обчислюваний мільярдами крон. У розробці крім декількох дослідницьких інститутів брала участь Apothekcmes Laboratory A/S. що спеціазізується на виробництві вакцин. Фірма разом з Норвезькою разою рибогосподарських досліджень фінансувала цей проект. Створена вакцина виявилася настільки ефективною, що хвороба в даний час не представляє скільки-небудь серйозної проблеми для галузі. Істотно і те, що різко скоротилося споживання антибіотиків в рибництві.

Вакцини прози вібріозу можуть вводитися рибам внутрішньочеревно (ін'єкції), оразьний або через ванни. Ін'єкція да< якнайкраще результати, а також забезпечує введення відповідної дози і дозволяє застосовувати стимулятори. Але ін'єкція неприйнятна для лососів з невеликою масою (менше 15 г). До недоліків методу слід віднести трудомісткість і тривалість процедури при масовій вакцинації, а також стрес риб.

Не дивлячись на тс. що вакцину легко вводити в корм, оральна вакцинація проти вібріозу практично не проводиться, оскільки необхідність застосування великих доз дуже здорожує І Іро і іедуру.

В даний час більшість вакцин проти вібріозу вводяться через ванни. Спосіб легко здійснимий і не викликає стресу у риб.

Тривалість імунітету залежить від концентрації вакцини і розміру вакцинованих риб. У риб масою 4 г і більш імунітет зберігається протягом року і більш. Вакцинацію мальків масою менше 2 г слід проводити двічі, другу через 14 днів після першої. Проте це стресої ємний і дорогий спосіб.

При вакцинації риб проти єрсініозу, що викликається бактеріями Yersinia rukeri, раніше використовували оральний спосіб: вакцина вводилася разом з кормом багато разів (5 разів на тиждень протягом двох тижнів, потім 1 раз на тиждень протягом тривалішого періоду), і стійкий імунітет досягався у 90% риб. Проте метод ванн виявився ефективнішим і менш дорожчим. Маса вакцинованих мальків не повинна бути менше 4 г. у таких риб імунітет зберігався довше (у риб масою 1.8 г він зберігався 170 днів, масою 3,2 г — 210 днів, а у риб масою 4.3 і цей термін досягав 300 днів). Якнайкращі результати отримують за умови імунізації риб в межах оптимальної дія даного виду риб температури; у лососевих риб вона складає 10-14°С. В цьому випадку вакцинація знижує смертність риб на 84%; споживання кормів і темп росту риб не знижуються. Оскільки період впрошування у лососевих риб складає більше 300 днів, одноразовій вакцинації недостатньо.

Британська фірма Aquaculture Vaccines l.td. (AVL) — найбільший постачальник промислових вакцин для багатьох європейських і скандинавських країн розробила вакцину AQUAVEC-ERM, 1 л якої досить дія обробки 100 кг форелі. Риб поміщають в розчин, шо містить вакцину, на 30 с. У СІНА як ефективний засіб дія боротьби з ERM запропонована Enteric Redmouth Bacterin. Вакцина концентрована. 1 і її досить для імунізації методом занурення 909 кг риби.

Дослідження з мстою розробки ефективної вакцини проти фурункульозу продовжуються близько 50 років, але. не дивлячись на деякі досяі нення, подібної вакцини не створено. Випущені до теперішнього часу вакцини швидше мали на меті зменшити смертність риб. а не ефективну профілактику фурункульозу. Порівняно недавно в Норвегії запропонована ефективна вакцина проти місцевих штамів A. salmonicida. що отримала назву Furovac. З 1991 р. після польових випробувань вакцина дозволена в Німеччині, де почастішали випадки фурункульозу, особливо гольця. Ефективність обробки Furovac залежить від багатьох чинників (умов утримання риб. відсутності латентних збудників, гемператури води і ін.). але вирішальне значення мас мінімальна маса риб. яка повинна бути не нижче за 4-5 p. 1 л вакцини достатні дія вакцинації 90 кг живої маси риби не залежно від їх розмір) і штучної маси. Риб витримують в розчині з вакциною протягом 60 с. Тривалість імунітету біля одного року, тому обробку рекомендують повторювані щорічно.

Обнадійливі результати отримані при польових випробуваннях, проведених в 1991 р. в І Іорвегії. нової оральної вакцини проти фурункульозу, запропонованою фірмою Aqua Health (Europe) Ltd. Розробники вважають, шо оральний спосіб вакцинації разом з ваннами і ін'єкціями займе певне місце в технологічному циклі вирощування лосося.

Серед інших комерційних вакцин слід назвати Ictaiuri Bacterin нову імерсійну вакцину, яку застосовують в СІ ПА для запобігання кишковій септицемії канального сома (ESC), Edvvardsiella ictaiuri. шо викликається. Вакцина успішно пройшла польові випробування в 16 районах трьох штатів, де в 1991 р. було оброблено 67 мли. піт. риб. Впровадження препарату в індустрію канальною сома дуже важливе, оскільки щорічні втрати від ESC досягають 10 мли. дол.. що складає 50% від загальної суми збитку, канального сома, що наноситься хворобами.

Створені експериментальні вакцини проти таких бактерійних хвороб, як бактерійна хвороба нирок, хвороба колумнаріс. aie велика вартість цих вакцин і ненадійні результати вакцинації перешкоджають застосуванню їх на практиці. Разом з цим проводяться дослідження по створенню полівалентних вакцин. Останні застосовуватимуться проти декількох хвороб одночасно (подібні вакцини вже існують в птахівництві). Фактично бівалентні вакцини, які діють проти фурункульозу і вібріозу або фурункульозу і ERM, вже с в промислових масштабах в багатьох країнах.

Останнім часом інтенсифікувалися дослідження по створенню вакцин проти вірусних хвороб риб: весняної віремії коропа (SVC). інфекційного некрозу підшлункової залози лососевих (IPN), вірусної геморагічної септицемії (VHS) і інфекційного некрозу ісмопоетичної тканини (ІЬГМ).

Результати досліджень по вакцинації проти весняної віремії ще недостатньо надійні і не дозволяю!ь застосовувати вакцину на практиці. Крім експериментальних була розроблена тільки одна комерційна вакцина чеської фірми "Бювета", що вводиіься коропам внутрішньочеревно або через ванни. У її склад входять два інактивовані штами вірусу Rhabdovirus carpi о. Вакцинація, проведена навесні, значно знижує смертність риб. зазвичай спостережувану восени, але на результати обробки негативно впливають низька температура (12 13°С) або інвазії риб (жгутикові або цестоди). Тому при проведенні

вакцинації необхідно дотримуватися наступних рекомендацій: вік риб повинен бути не менше 40 днів, температура води вище 20°. спосіб введення ванни або виутрішньоочеревинні ін'єкції. За оптимальних умов період імунітету складає близько 8 міс.

Розробка вакцин проти IPN. VIIS. IHN раніше стримувалася технічними проблемами, але використання сучасних генетичних методів дозволило отримані обнадійливі результати. Вважають, що вакцини будуть скоро створені. Проте висловлюються побоювання, що вірусні вакцини, створені за допомогою листкової біоінженерії, будуть дорог ими і тому малодосту пними для багатьох споживачів.

Крім розробки вакшш проти бактерійних і вірусних хвороб проводяться дослідження по імунопрофілактиці инвазий риб, зокрема іхтіофтиріозу. але результати робіт представляють поки суто експериментальний інтерес.

Проводилися досліди і по імунізації риб проти інвазій жгутикових з родів I rypanosoma і Cryptobia, а також ірематод з p. Diplostomum. У експериментальних умовах знижувалася смертність риб після імунізації, але це лише нечисленні перші експерименти і до практичного застосування їх ще далеко. За допомогою вакцини припускають справитися з лепеофтеирозом. що іавдає серйозного збитку морському лососеводству. На проведення цих досліджень СЕС і Департамент сільського господарства і рибництва Шотландії виділили в 1990 р. 120 гис. ф. ст.

Віддаленішою перспективою с вакцинація ракоподібних, хоча вже існують промислові вакцини для імунізації омарів і креветок. У країнах Південно-східної Азії. Центральної і Латинської Америки широко використовують першу промислову вакцину для креветок Penaeid Multiualenbstocterin (РМВ). яка запобігає багато бактерійних інфекцій мололи креветок. Достатньо ефективна вакцина проти вібріозу креветок розроблена японськими фахівцями, причому спосіб імунізації не має істотного значення.

11с дивлячись на досягнуті успіхи в створенні вакцин, є і певні тру днощі. Основною проблемою с способи введення вакцин. Зараз найбільшого поширення набула вакцинація за допомогою занурення риб у ванни. Проте на крупних фермах рибоводів навіть такий спосіб став тривалою і трудомісткою операцією. Тому була розроблена апаратура для автоматичного занурення, що дозволяє швидко вакцинувати рнб з використанням мінімальної кількості персоналу. У зв'язку з тим. що деякі вакцини можуть бути ефективні тільки у разі введення їх у вигляді ін'єкцій, розробляються прилади для автоматичної ін'єкції. Так. шведськими фахівцями запропонований Fish injector — пневматичний пістолет (під низьким тиском) для вакцинації риб. Голка для інокуляції встановлюється нарівні, що не перевищує 2-8 мм. лоза вакцини, шо вводиться, незалежно від розміру і маси риб — 0.1 мл. Тривалість операції 1 з; інжектор легко застосовувати для риб масою не більше 160 р.

Дамською компанією Dali А/S запропонована машина для автоматичної вакцинації риб масою від 15 до 120 г; з її допомогою протяг ом 1 ч можна обробити близько 2200 шт. риб.

Фірма TRIO Industrier A/S спільно з норвезьким ветеринарним інститутом в Осло розробила машину I rio VMI для вакцинації смолтов і інших дрібних риб. Принцип роботи нової машини заснований на адаптації машини, раніше використовуваної для оброблення сардини. Управління машиною здійснюється за допомогою комп’ютера, в якому використана волоконна оптика. Мета розробки —збільшення кількості і якості ін'єкцій, шо проводяться, а також створення дешевої машини продуктивністю 50 риб/мін (уручну ін'єктують 15 риб/мін). Машина проста в експлуатації, оператор мас

можливість повністю контролювати процес. Машину легко дезинфікувати, але основне преимущесгво—отсутегвие травматизації і стресу у оброблюваних риб. Рибу, заздалегідь анестезовану, уручну вволять в машину, потім автоматично вимірюють і розташовують в камері, куди виведена голка шприца. Якщо з якої-небудь причини вакцина не була введена, комп'ютерний коп і роль попереджає про не: комп'ютер не визначає кількість проін'ектованих риб. їх розміри, товщину, масу (надалі ця інформація придатна для розподілу риб за розміром або іншими параметрами). Машина видає споживачеві копію, підтверджуючу проведення вакцинації. Машинному способу вакцинації запобігає пошкодження гканин поблизу місця ін'єкції, що зазвичай спостерігається при ручному способі ін'єкції, оскільки крапка для ін'єкції вибирається індивідуально уздовж центральної лінії тіла, коливання складають ±6 мм. Машина запатентована більш ніж в 20 країнах. Найближчим часом компанія планує розробити могутнішу машину, за допомогою якої можна буде вводити антибіотики безпосередньо хворим рибам і відмовитися від застосування лікувальних кормів.

Розвиток імунології н наший країні, за визначенням фахівців, відбувається поволі і в недостатньому об'ємі. Для прогресу наукових досліджень і їх практичного застосування необхідно вирішити не тільки організаційні питання, але і оволодіти передовими методами імунологічного дослідження організму риб з використанням сучасного устаткування і реактивів.

Приведені далеко не повні дані указують на великі можливості практичного застосування імунопрофілактики в аквакультурі. але одночасно свідчать, як багато ще необхідно зробити в цій області.

Контрольні запитання

51. Як здійснюють вакцинацію риб?

52. І Іазвіть переваги та недоліки кожного методу імунізації риб?

53. Які показання для проведення імунізації риб?

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1493 | Нарушение авторских прав