Специфичность действия амилазы
α-амилаза катализирует гидролитическое расщепление крахмала с образованием мальтозы. Промежуточными продуктами в данной реакции являются различные декстрины (амино-, эритро-, ахро-, мальтодекстрины).
Степень гидролиза крахмала можно контролировать по цветной реакции с йодом. Крахмал дает с йодом синее окрашивание, декстрины в зависимости от размеров молекул окрашиваются с йодом в разные цвета (сине-фиолетовый, красно-бурый, желто-бурый), а конечные продукты с йодом окраски не дают. Второй контрольной пробой может быть реакция на наличие свободных альдегидных групп.
Исследуемый материал: слюна
Реактивы: 1 %-ный раствор крахмала; 1 %-ный раствор сахарозы; 10 %-ный раствор NaOH; 5 %-ный раствор CuSO4; реактив Люголя; дистиллированная вода.
Оборудование: пробирки, пипетки, термостат, электроплитка, водяная баня.
Ход работы. Готовят 2 инкубационные пробы, как указано в таблице, используя в качестве субстратов для амилазы 2 вещества – крахмал и сахарозу.
Пробы выдерживают в термостате 15 мин при 37 °С. Затем с первой пробой проделывают 2 реакции: Троммера и реакцию с йодом. Со второй пробой проделывают реакцию Троммера.
Реакция Троммера. К содержимому пробирок добавляют 2 мл раствора с массовой долей гидроксида натрия 10 %, при встряхивании по каплям раствор с массовой долей сульфата меди 5 % до появления неисчезающей мути гидроксида меди (II). Содержимое пробирок нагревают на водяной бане до изменения цвета. Появление желтого окрашивания, переходящего в красное, указывает на наличие восстанавливающих сахаров (глюкозы и фруктозы), которые в щелочной среде восстанавливают гидроксид меди (ІІ) в оксид меди (І), сами при этом окисляются до альдоновых кислот.
Оформление работы. Вносят в таблицу результаты реакций. Делают вывод о специфичности амилазы.
Дата добавления: 2015-08-06 | Просмотры: 782 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 |
|